细胞工程4试卷.doc

第三章 细胞工程实验室及基本操作 第一节 实验室及仪器设备 一、实验室 （一）基本操作室 1.洗涤区 干燥箱、控水架、工作台等 2.灭菌区 灭菌锅、过滤除菌装置 3.贮藏区 贮藏柜、冰箱 4.培养基配制区 （二）无菌操作室 1.缓冲准备区 2.接种区 （三）培养室 （四）鉴定分析室 （五）温室 二、仪器设备 （一）必要器皿 培养瓶、培养皿、培养板、盛装器皿、计量器皿、金属器械 （二）常用仪器设备 无菌操作仪器设备、培养仪器设备、药品贮存和配制仪器设备、观察分析仪器设备、其它仪器设备 一、清洗 二、消毒灭菌 ㈠消毒灭菌方法 干热消毒灭菌法、湿热消毒灭菌法、过滤除菌法、射线消毒灭菌法、酒精灯消毒灭菌法、消毒剂消毒法、抗生素抑菌法 ㈢培养基的消毒灭菌 ㈣玻璃器皿、塑料器皿和器械的消毒灭菌 ㈤无菌操作室的消毒灭菌 无菌的范畴是：经高温灼烧或一定时间蒸煮过后的物体，经其他物理的或化学的灭菌方法处理后的物体(当然这些方法必须已经证明是有效的)，高层大气、岩石内部、健康的动、植物的不与外部接触的组织内部，强酸强碱，化学元素灭菌剂等表面和内部等等都是无菌的。从以上可以看出：在地球表面无菌世界要比有菌世界小得多。 灭菌 消毒：指杀死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再发生危害作用. 显然经过消毒，许多细菌芽孢、霉菌的厚垣孢子等不会完全杀死，即由于在消毒后的环境里和物品上还有活着的微生物，所以通过严格灭菌的操作空间(接种室、超净台、等)和使用的器皿，以及操作者的衣着和手都不带任何活着的微生物。 在这样的条件下进行的操作，就叫做无菌操作。 物理方法 如干热()、湿热(常压或高压蒸煮)、射线处理(紫外线、超声波、微波)、过滤、清洗和大量无菌水冲洗等措施； 化学方法 使用升汞、甲醛、过氧化氢、高锰酸钾、来苏儿、漂白粉、次氯酸钠、抗菌素、酒精化学药品处理。这些方法和药剂要根据工作中的不伺材料不同目的适当选用。 1——高压蒸汽灭菌 2、用于无菌操作的器械采用灼烧灭菌（95%的酒精，酒精灯火焰上灼烧） 3、玻璃器皿及耐热用具采用干热灭菌（烘箱加热到160-180℃持续90分钟） 4、不耐热的物质采用过滤灭菌（一些生长调节剂如赤霉素、玉米素、脱落酸和一些化学成分在高温高压下会发生降解而失去效能或降低效能） 5、空间采用紫外线和熏蒸灭菌（紫外线灭菌与熏蒸灭菌） 6、一些物体表面用药剂喷雾灭菌（ 75%的酒精1%-2%的来苏儿溶液以及0.25%-1%的新洁尔灭） 7、植物材料表面用消毒剂灭菌 三、无菌操作 ㈠ 无菌操作前的准备工作 ㈡ 无菌操作步骤 ㈢ 污染源及其表现特征 一、植物培养基及其配制 ㈠培养基成分 1.无机元素 大量元素（浓度＞0.5mmol/L）：C、H、O、N、K、P、Mg、 S、Ca 微量元素（浓度＜0.5mmol/L） ：Fe、B、Mn、Zn、Mo、 Cu、Co、Cl 2.有机元素 ⑴氨基酸类 有机N 源 Gly、CH、LH ⑵维生素类 VB1、VB6、VB5、VB11、VH、VB3、VC ⑶糖类 碳源、能源、维持渗透压 ⑷天然有机添加物类 椰乳、马铃薯汁、番茄汁 3.生长调节物质 ⑴ 生长素类 促进伸长生长和分裂、诱导愈伤组 织形成、促进生根 2,4-D IAA、NAA、IBA ⑵ 细胞分裂素类 KT、6-BA、ZT ⑶ 赤霉素类 GA3 ⑷ 脱落酸 诱导休眠、促进衰老和脱落 ABA ⑸乙烯 催熟 4.琼脂 二、动物培养基及其配制 ㈠培养基成分 1.生长培养基 ⑴水 溶剂 三蒸水 ⑵无机盐 渗透压 ⑶微量元素 小于1ug/L ⑷维生素 ⑸缓冲系统 维持培养基的pH值 ⑹能源和碳源 葡萄糖、半乳糖、丙酮酸、琥珀酸 ⑺氮源 成分明确和成分不明确 血清 ⑻激素和生长因子 ⑼添加剂 2.维持培养基 ㈡培养基制备 1.天然培养基 ⑴血清 ⑵水解乳蛋白 ⑶胚胎提取液 ⑷胶原 2.合成培养基 MEM、DMEM、M199、T