高中生物《基因工程概述》学案1 苏教版选修3.docVIP

第一章 基因工程第一节 基因工程概述 一．基因工程的概念 操作环境 操作对象 操作水平 基本过程 结果 生物体外 基因 分子水平 剪切→拼接→导入→表达 人类需要的基因产物由于基因工程是在水平上进行,因此又叫做。 1．来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。 2．功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两 个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 3．结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。 （二）“分子针线”——DNA连接酶 1．分类：根据酶的来源不同，可分为EcoliDNA连接酶和T4DNA连接酶两类DNA连接酶 E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶 的比较： ①相同点：都缝合磷酸二酯键 ②区别：E．coIiDNA连接酶来源于大肠杆菌，只能使黏性末端之间连接； T4DNA连接酶能缝合两种末端，但连接平末端之间的效率较低。 ★DNA连接酶与DNA聚合酶作用的比较 DNA连接酶DNA聚合酶DNA 双链 单链 模板 不要模板 要模板 连接的对象 2个DNA片段 单个脱氧核苷酸加到已存在的单链DNA片段上 相同点 作用实质 形成磷酸二酯键 化学本质 蛋白质 三 “分子运输车”——载体 1.载体具备的条件： 2.基因工程的载体有： 和 动、植物病毒 等。 最早应用的载体是质粒，它是细菌细胞中的一种很小的双链环状DNA分子。 三．基因工程的基本过程 一 获得目的基因（目的基因的获取） 1.获取方法主要有两种：①从自然界中已有的物种中分离出来，如可从基因文库中获取。 ②用人工的方法合成。 ★获得原核细胞的目的基因可采取直接分离，获取真核细胞的目的基因一般是人工合成。 ★人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法。 2.利用PCR （1）PCR的含义：是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。 （2）目的：获取大量的目的基因 （3）原理：DNA双链复制 （4）过程：第一步：加热至90～95℃DNA解链为单链； 第二步：冷却到55～60℃，引物与两条单链DNA结合； 第三步：加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始进行互补链的合成。 （5）特点：指数形式扩增 二 制备重组DNA分子（基因载体1．重组DNA分子的组成：除了目的基因外，还必须有标记基因。 ★标记基因的作用：鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。 2．方法：同种限制酶分别切割载体和目的基因，再用DNA连接酶把两者连接。 三 转化受体细胞（将目的基因导入受体细胞） 1.转化的概念：常用的转化方法： 将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法 ②将目的基因导入动物细胞：最常用的方法 ③将目的基因导入微生物细胞： 四 筛选出获得目的基因的受体细胞、培养受体细胞并诱导目的基因的表达（目的基因的检测与鉴定） 1.首先要检测 2.其次还要检测 3.最后检测 4.有时还需进行 2