第12章高效液相色谱法.pptVIP

与经典液相色谱法相比 颗粒极细（一般为10?m以下）、规则均匀的固定相，(键合相)传质阻抗小，柱效高，分离效率高； 高压输液泵输送流动相，流速快，分析速度快； 高灵敏度检测器，灵敏度大大提高。紫外检测器最小检测限可达10?9g，而荧光检测器最小检测限可达10?12g。 影响容量因子的因素 离子对试剂的种类和浓度：碳链长度增加，溶质的k增大；在一定范围内试剂的浓度升高，溶质的k增大 流动相的pH：有利于组分和离子对试剂离子化时（离子对的形成），组分的k值最大 固定相 、流动相性质（同一般RP-HPLC）。 3.梯度洗脱 这种洗脱方式主要应用于分离分配比k相差很大的复杂混合物。 在同一个分析周期中，按一定程度不断改变流动相的浓度配比，称为梯度洗脱。从而可以使一个复杂样品中的性质差异较大的组分能按各自适宜的容量因子k达到良好的分离目的。 HPLC有等度洗脱和梯度洗脱两种洗脱方式。 常向流动相中加入0.1%∽1%的醋酸盐、磷酸盐可减少残余硅醇基的作用，抑制峰形拖尾，并改善分离效果 A溶剂为高强度（甲醇或乙腈）B溶剂为低强度（水） A% A% A% A% 设定30分钟的时间，梯度为从甲醇比例从5％过渡至80％，然后根据所得的图谱分析这个梯度，若前面没出峰可加大甲醇比例至10％，20％，若图谱中峰集中在某个时间段，则应把这个时间段的比例变化拉的