WesternBlot黄强开分析.ppt

* 脱脂奶粉（5％） BSA(牛血清白蛋白)可能有封闭不均匀的情况 室温1小时 封闭膜上的空白位点 －－封闭:室温1h 或 4℃过夜 －－TBS洗涤5min x 3次 一抗 购买时 五注意 注意种属(rat mouse rabbit )， 注意特性（单抗、多抗） 注意用途（免疫荧光 组化） 注意品牌（Abcam Sigma CST life Santa） 操作 : 严格无菌防污染 可分装保存 稀释浓度: 经验 文献 封口袋摇床上缓慢摇动 37 ℃ 1h 或 4℃过夜, TBS洗涤5min x 3次 （一抗中有叠氮钠，洗涤时间及次数增加） 二抗 看种属 （羊抗兔 兔抗鼠） 看用途 （HRP 荧光） 看价格 （国产品牌已能胜任 博士德 中杉 看品牌 但实验室买进口包装更划算） 操作: 封口袋摇床上缓慢摇动或 倒扣法孵育 37 ℃ 1h TBST洗涤5min x 3次 大分子量蛋白 6%-8% 的胶 延长胶平衡时间 增加转膜时间 提高电压或电流 但要注意温度 小分子量蛋白 12%-15%的胶选小孔径的膜 0.22um 缩短时间 降低电压或电流 浸泡膜时间小于10min （0.45μm也可用于小分子量，0.22μm背景偏深） 一抗: 4