Westernblot试剂配制及操作流程重点.docVIP

Western-Blot操作流程 试剂配制 蛋白提取试剂 RIPA裂解液： 50mM Tris（MW121.14，PH7.5） 3.02g 150mM NaCl 4.38g 1%TritonX-100 5ml 1%脱氧胆酸钠 5g 0.1%SDS 0.5g 蒸馏水至 500ml。 调pH值至7.5。 混匀后4℃保存，长期保存于-20℃。使用时，加入蛋白酶抑制剂cooktail。 2. 蛋白酶抑制剂cooktail 所需母液成分： （1）100mmol/L PMSF PMSF 17.4mg 异丙醇 1ml 溶解后，分装于1.5ml离心管中，-20℃保存。 （2）10mM 亮肽素leupeptin: -20℃保存 （3）2.1mg/ml 抑肽素Aprotinin: 4℃保存 配制： 成分 终浓度 每ml裂解液所加母液量 PMSF 1mmol/L（储存浓度稀释100倍） 10ul Leupeptin