DNA的粗提取和鉴定分析.ppt

* * * * 课题 DNA的粗提取与鉴定 染色体成分 蛋白质 RNA(少量) DNA 提取DNA的基本思路： 利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。 * DNA的粗提取与鉴定 1．原理、方法和目的 基本原理 方法 目的 DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，在0.14 mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低 溶于NaCl溶液中并稀释 ①NaCl溶液为2 mol/L时，DNA溶解，而部分蛋白质发生盐析生成沉淀，通过过滤可除去部分蛋白质及不溶于NaCl溶液的杂质 ②当NaCl溶液稀释至0.14 mol/L时，DNA析出，过滤可除去溶于NaCl溶液的部分蛋白质和其他杂质 DNA不被蛋白酶所水解 加入嫩肉粉 嫩肉粉中含木瓜蛋白酶，水解蛋白质（酶的专一性） DNA不溶于酒精溶液 加入冷却酒精(95%) DNA析出，除去溶于酒精的蛋白质 DNA可被二苯胺染成蓝色 加入二苯胺，并沸水浴 鉴定DNA 高温 DNA耐高温 DNA和蛋白质对高温耐受性不同：蛋白质、DNA热稳定性不同。大多数蛋白质不能忍受60～80℃的高温，而DNA在80℃以上才会变性。 DNA对洗涤剂耐受性 洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。 加入洗涤剂 * 1）不同浓度NaCl中DNA溶解度不