第三章重组DNA技术.pptVIP

Edman發表了一種聚肽的順序切割法，這可能是目前蛋白質序列分析中，最重要的技術。末端胺基酸的移除，是經兩個步驟完成的。首先，胜肽在pH 8下，以異硫氰酸苯酯(phenylisothiocyanate)處理，使末端胺基酸轉變為硫胺基碳酸苯的衍生物(phynylthiocaibamyl derivate)(PTC-太胜)。第二步是PTC-胜肽用無水的三氟醋酸(trifluoroacetic acid)處理，催化末端胺基酸環化為Anilino-thiazolinone的衍生物。 ? 五環的生成，是由於硫胺基酸上的硫原子，對第一個胜肽鍵上的羰基作親質性的攻擊，伴隨環狀封閉的，是第一個和第二個胺基酸間肽鍵的斷裂，在這種非水解狀況下，所有其他的肽鍵都保持完整。末端胺基酸的anilino-thiazolinone若用有機溶劑，可以從胜肽中萃取出來。胜肽中的胺基酸，如果有必要再進行切割，可重複地偶合和環化，直到所有的胺基酸都被移除。 ? 以Edman切割法逐步移除的胺基酸都被鑑定後，聚肽胺基酸順序就被建立了。移除的胺基酸，可用環狀衍生物直接測定，或者用胜肽與殘留的胜肽間胺基酸組成的差異間接測定。 DNA微陣列分析技術 DNA微陣列分析已被用在： １分析基因活性（表現）。科學家能決定出哪些 基因具有活性，比如說在一個特定的細胞，組 織或器官中，他們能找出基因表現的變化和物理 或生化過程