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第一章 脱落细胞检查技术和临床应用评价 脱落细胞学：是对人体各部位特别是管腔器官表面的脱落细胞，或对病变组织通过细针吸取的方法获得的细胞染色并在显微镜下观察作出诊断，又称诊断细胞学。 标本来源：自然排出物 体腔抽出液 细针穿刺吸取液 标本采集和涂片制作 一、标本采集 原则：尽量减少受检者的痛苦，取得合作；方法简便、实用、经济；尽量取得足够供诊断的细胞成分；及时快速送检立刻制片；绝对避免污染；标本号标记清楚。 途径： 细针穿刺；脱落细胞学检查 常用方法 直视采集法：直接用刮片刮取、吸管吸取、刷洗 自然分泌液采取法：痰涂片、尿液涂片、前列腺液涂片、乳头溢液涂片 灌洗法：空腔器官、盆腔或腹腔 摩擦法：鼻咽、食管、胃 针穿抽吸法：浆膜腔关节腔积液，淋巴结、软组织、甲状腺、肝 浆膜腔积液的处理 抽出应立即送检（4℃保存，24h内处理完标本） 对检查影响较大的是过多成熟的红细胞和标本的严重凝固，需处理，淋巴细胞分离液或低渗方法可去除红细胞，凝固的积液将凝块吸出，剩余液体离心涂片。 二、涂片制作（一）要求： 1 标本要新鲜 2 操作要轻柔：细胞分布均匀；薄厚适当勿挤压摩擦，以免细胞损伤变形； 3 玻片要清洁 4 涂片要牢固 5 涂片数量 6 标号准确 （二）涂片制备方法 推片法 涂抹法 压拉涂片法 吸管推片法 喷射法 印片法 （三）涂片的固定 目的：保持细胞形态结构，防止其自溶。 固定液：首选95％酒精，乙醇乙醚，氯仿乙 醇 注意事项：巴氏染色，涂片勿在空气中干燥后染色；固定时间不短于15分钟（48h内进行巴氏染色）；固定液要达到90％以上；液体标本离心后涂片，待潮干后再固定，宫颈的刮片、痰涂片、拉网涂片、内窥镜的刷片、针吸涂片应立即固定。 干燥固定 固定时间：15～30min 固定方法：带湿固定 （四）涂片的染色 目的：使细胞结构清晰显示；应用各种染色使细胞浆与核恰当显示不同颜色；使细胞透明度高，结构清晰。 方法：常规染色为巴氏染色，配合HE、Giemsa、特染等。 1巴氏染色法 水化：固定好的涂片→80％、70％、50％乙醇→蒸馏水 各1min 染核：苏木素染3～5min 分色：1％盐酸中数秒，水洗 蓝化：置饱和碳酸锂溶液中1min，水洗 脱水：50％、70％、80％、95％乙醇各1min 染浆：置于橘黄G液中染2～4min→95％乙醇洗2次→置于 EA36染液中4～5min 脱水：95％、无水乙醇各1～2min→二甲苯透明2～ 3min ×2 封片：中性树胶封固 适用于上皮细胞染色和阴道涂片观察女性激素的影响 优点：细胞具有多色性 缺点：染色程序较复杂 结果判定：胞核呈紫蓝色，核仁红色，底层细胞、中层细胞和表层角化前细胞为淡蓝色，不全角化细胞（角化前细胞）呈粉红色，角化细胞呈桔黄色。 注意事项： 染液要充分溶解 苏木素要染前月余配制，用时每天过滤1次，加新液。室温低时不易着色，可50℃加热 盐酸分化前镜下观察以确定分化时间 涂片在橘黄液中不宜过长EA36染液配制和使用前应用滤纸调试 2 HE染色：透明度好、核浆对比鲜明、染色效果稳定，核紫蓝色、浆淡玫瑰红色。步骤简单，适用于痰涂片。 3 瑞氏－吉姆萨染色：多用于血液、骨髓细胞学检查 常规巴氏制片与液基薄层制片比较 巴氏 液基薄层制片 10～20％标本移至玻片 100％标本收集至保存液中 干固定 湿固定 制片技术不稳定，不能重复 技术稳定，可重复 易受血黏液炎性渗出物覆盖 去除血黏液和大量炎性遮盖物 细胞分布不均匀，易重叠 细胞分布均匀集中，不易重叠 镜下观察费力，易漏诊 镜下观察省力，不易漏诊 成本较低 成本较高 染色 一、瑞特染色法(Wright s) 特点:固定和染色合并在一起,手续简便,染色时间短,对白细胞特异性颗粒着色较好,但对核的着色差. 1.瑞氏染料:由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝组成有复合染料。 亚甲蓝(M+)为四甲基硫堇染料，有对醌型和邻醌型两种结构。通常为氯盐，即氯化美蓝,其有色部分为阳离子，无色部分为阴离子 。美蓝容易氧化为一、二、三甲基硫堇等次级染料。市售美蓝中部分已被氧化为天青。 伊红(E-)通常为钠盐,既伊红化钠有色部分为阴离子，无色部分为阳离子，其有色部分为酸性 。 伊红和亚甲蓝混合后，产生一种憎液性胶体伊红化美蓝中性沉淀(ME)，即瑞特染料(其溶于甲醇即瑞特染液)。 ME （瑞氏染料）—— —— →