13(东方)第三章蛋白质化学1精读.pptVIP

2005-9-12 （4）pauly反应 His + 重氮苯磺酸 红色（棕红色） Tyr + 重氮苯磺酸 橘黄色 （5）Folin一酚反应 + 磷钼酸 Tyr 磷钨酸 or Trp 蓝色（钼蓝与钨蓝混合物） （6）乙醛酸反应（Ehrlich反应） Trp+乙醛酸或二甲基氨甲醛 紫红色 （7）坂口（Sakaguchi）反应 在碱性溶液中Arg 胍基 与含α-萘酚及次氯酸钠的物质反应生成红色物质。 （8）亚硝基亚铁氰酸钠反应 Cys （巯基）+亚硝基亚铁氰酸钠 红色 稀氨溶液 1．分配层析法 分配系数 Kd CA CB CA：某物质在流动相（A相）中的浓度 CB：某物质在固定相（B相）中的浓度 原理：根据样品（如Aa混合物）在两种互不相溶的溶剂中分配系数的不同而达到分离的目的。 （五）氨基酸分离分析 原理：以滤纸纤维吸附的水为固定相，以水饱和的有机溶剂（如丁醇-乙酸）为移动相，将混合氨基酸溶液点于滤纸上，当有机相经过样品时，各种氨基酸在有机溶剂和水中分配。 分配层析例：纸层析 只要溶剂系统、温度、湿度和滤纸型号等实验条件确定，则每种氨基酸的Rf值是恒定的。Rf值愈大，表明氨基酸前进愈快，在有机相中的溶解度愈大。 单向纸层析图 Rf值 *生物化学 主讲：李盛贤 * 第三章 蛋白质化学 主要介绍氨基酸、肽和蛋白质的结构、性质、功能以及蛋白质的结构与功能的关系。 主要内容： James B. Sumner Cornell Medical School F?dd 1887 Nobelpris 1946 James B. Sumner等，1926年从刀豆中分离出脲酶并制成结晶，因此荣获1946年诺贝尔奖 enzyme and protein cystallization .。 一、蛋白质的组成 █蛋白质可以是生物体的结构物质，也可以是生理功能物质。蛋白质是生命现象的基本的物质基础。 （一）蛋白质组成 ◆元素组成：蛋白质都含 C、H、O、N 四种元素，多数蛋白质还含少量S，有些蛋白质还含其它元素：Fe、Cu、Mo、I等。 ◆各种蛋白质的含氮量接近16%，测定生物样品中的含氮量可计算出样品中蛋白质的含量。凯氏（kjedahl）定氮法据此测定生物样品中蛋白质的含量： 蛋白质含量 蛋白氮×6.25 式中6.25即16%的倒数，为1g氮代表的蛋白质量（g）。 不同来源蛋白质的组成元素百分比 元素 质量分数% 元素 质量分数% C O N 50 23 16 H S P、Fe、Cu等 7 0～3 微量 二、蛋白质的基本结构单位—氨基酸（amino acid） （一）氨基酸的通式、分类、结构和代号 1、氨基酸的结构通式 或 α-氨基酸结构的共同特点：α-氨基和α-羧基连在α-碳原子上。有一个可变的侧链R 。 氨基酸在溶液及反应中常以两性离子形式存在。 除甘氨酸外，所有α-氨基酸的α-碳原子都是手性碳原子，都有旋光性；每一种氨基酸都有D-型和L-型两种旋光异构体 。 2、氨基酸的分类、结构、代号 氨基酸分类： 根据氨基酸的酸碱性分类 ① 酸性氨基酸2种：谷氨酸和天门冬氨酸，含一个氨基和两个羧基。 ② 碱性氨基酸3种：精氨酸、赖氨酸和组氨酸，含一个羧基、两个或两个以上的氨基或亚氨基。 ③ 中性氨基酸15种：含一氨基一羧基，还包括两种酸性氨基酸产生的酰胺。 中性氨基酸（侧链脂肪族5种） 氨基酸的结构、代号（三字母和单字母）： 中性氨基酸（侧链脂肪族含羟基氨基酸2种） 中性氨基酸（侧链脂肪族含硫氨基酸2种） 中性氨基酸（侧链芳香族氨基酸3种） 中性氨基酸（侧链杂环氨基酸1种） 中性氨基酸（两种酸性氨基酸产生的酰胺2种） 酸性氨基酸2种 3种 （二）氨基酸的构型、旋光性和光吸收 氨基酸的构型：D-型和L-型。蛋白质中的氨基酸都是L-型 。 丙氨酸的D-型和L-型 旋光性： 除Gly都有手性碳原子，都有旋光性。L-氨基酸多为右旋性，少数为左旋性。 光吸收： Trp、Tyr和 Phe在280nm附近吸收紫外光，因为分子中苯环含共轭双键。 利用紫外分光光度法测定样品中蛋白质的含量 Lambert—Beer（朗伯-比尔）定律： A lg － lgT εcl I0 I A—吸光度 absorbance ，也称光密度（optical density，OD ε — 摩尔吸收系数（旧称摩尔消光系数）； l —吸收杯的内径或光程长度（cm）； I0—入射光强度； I —透射光强度； T—透光率（transmittancy， I/I0 ）。 式中： （三）氨基酸的酸碱性质和等电点 1、氨基酸的两性离子形式 氨基酸分子中含有碱性的氨基（-NH2）和酸性的羧基（-COOH）