9微生物检定法要点.pptVIP

山东省药品检验所 （二）浊度法扩大应用课题情况 《中国药典》2010年版大观霉素比浊法实例 （5）方法的确定 抗生素类别 试验菌 培养基 灭菌缓冲液 抗生素浓度（u/ml） 培养条件 大观霉素 大肠杆菌 CMCC B 44103 抗生素检定培养基III（pH值7.0） pH7.0 30～72 37℃±0.5℃ 3h～4h 山东省药品检验所 （二）浊度法扩大应用课题情况 《中国药典》2010年版大观霉素比浊法实例 大观霉素对照品、供试品生长曲线图 山东省药品检验所 （二）浊度法扩大应用课题情况 《中国药典》2010年版大观霉素比浊法实例 注意事项 （1）实验用菌悬液应当天使用，稀释后在650nm波长处吸光度值为1.0的菌液，原菌液的加入量为1%。 （2）试验中我们使用的抗生素检定培养基III（脱水培养基），需测定其pH值，如偏酸灭菌后需用1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值7.0后使用。 山东省药品检验所 小 结 2010版药典浊度法增收的21个品种，均是管碟法收载的品种。每个品种的测定方法都经过起草单位的方法学验证和至少2个单位的复核，方法可行。 浊度法和管碟法对样品的测定结果基本一致，方法可任意选择。浊度法采用液体培养基，消除了扩散因素的影响，对多组分抗生素（庆大霉素、乙酰螺旋霉素、吉他霉素、麦白霉素等）的效价测定更有优势。 山东省药品检验所 （三）微生物检定法的前景展望 （1）国外药典收载情况和发展趋势 （2）微生物检定法在其它领域的应用 （3）微生物检定法的应用的局限性 （4）含量与效价量值统一的研究 山东省药品检验所 （三）微生物检定法的前景展望 （1）国外药典收载情况和发展趋势 USP32版（2009年）和USP28版（2005年）比较 品种不断更新 一个品种，两种方法 USP32版（2009年版）： 管碟法22个品种、浊度法19个品种，其中17个品种是管碟法和浊度法共有的品种。 USP28版（2005年版） 管碟法21个品种、浊度法19个品种，其中2个品种是管碟法和浊度法共有的品种。 山东省药品检验所 （三）微生物检定法的前景展望 USP32版微生物检定法收载的品种： 两种方法共有（17个）：多粘菌素E甲磺酸盐、双氢链霉素、红霉素、硫酸新霉素B、硫酸庆大霉素、交沙霉素、丙酸交沙霉素、单硫酸卡那霉素、硫酸卡那霉素、硫酸新霉素、利福霉素钠、螺旋霉素、硫酸链霉素、泰洛星、盐酸万古霉素、硬酯酸红霉素、赖甲环素、妥布霉素 管碟法（5个）：两性霉素B、杆菌肽锌、硫酸博来霉素、硫酸萘替米星、制霉菌素 浊度法（2个）：短杆菌肽 、安普霉素 山东省药品检验所 （三）微生物检定法的前景展望 USP32版收载品种与USP28版的比较 管碟法 删除品种：羧苄西林、头孢噻吩、头孢匹林、氯唑西林、萘夫西林、替卡西林、苄青霉素 增加品种：单硫酸卡那霉素、硫酸卡那霉素、交沙霉素、丙酸交沙霉素、螺旋霉素、利福霉素钠 浊度法 删除品种：阿米卡星、氯霉素、金霉素、卷曲霉素、地美环素、多西环素、美他环素、罗利环素等 增加品种：硫酸庆大霉素、红霉素、短杆菌肽、交沙霉素、丙酸交沙霉素、螺旋霉素、利福霉素钠 山东省药品检验所 （三）微生物检定法的前景展望 从美国药典近几版微生物检定法增修订品种可以看出： 化学法替代了微生物法，如β-内酰胺类、四环素类等 一个品种，同时收载管碟法和浊度法两种方法。 山东省药品检验所 （三）微生物检定法的前景展望 （2）微生物检定法在其它领域应用 微生物发酵药物的筛选 细菌耐药性监测 临床药代动力学研究血药浓度的测定 疫苗中残留抗生素药品的测定 奶制品中残留抗生素的测定 山东省药品检验所 （三）微生物检定法的前景展望 （3）微生物检定法的应用的局限性 测定的是有抑菌作用物质的总效价，测定结果不能反映药品的纯度，不能排除其他组分或活性杂质的干扰。 对复方制剂产品的检验，微生物检定法选择性差，效价测定受其他成分的影响。 配方中含有防腐剂，防腐剂具有抑菌作用，使样品的抑菌圈增大，导致标准品和样品的剂量反应曲线偏离，采用微生物法测定含量时可能会产生偏差。 山东省药品检验所 （三）微生物检定法的前景展望 （4）含量与效价量值统一的研究 采用化学分析法替代微生物检定法是抗生素药品质量分析的发展趋势。必须通过建立HPLC方法并完成验证工作，制备出基准物质并对其进行纯度、效价分析，完成效价与含量的量值统一工作，逐步建立其相关的对照品，最终完成HPLC色谱法对微生物检定法的替代工作。 山东省药品检验所 小 结 微生物检定法可以直观、特异地反映抗生素药品的抗菌活性，显示临床特点，同时微生物法所需的仪器设备简单、成本低，是抗生素效价测定的不可缺少的分析手段。 微生物检定法应用范围广，需要不断建立和完善