生化分离工程复提纲.docVIP

第一章 生化分离的研究历史 1.生化分离工程：通过微生物发酵过程、酶反应过程或动植物细胞大量培养获得生物化工产品，从上述发酵液、反应液或培养液中分离、精制有关产品的过程即称为生化分离工程或称下游加工过程。 2.上游：菌种，基因工程，分子生物学，遗传学 3.中游：微生物发酵工程，动植物细胞培养， 海洋生物培养 4.下游：生物分离工程 第二章 发酵液预处理 1.生物分离过程的一般流程 生物分离工艺要求：（1）高纯度；（2）大规模；（3）经济性；（4）生物相容性。 3.对产物的要求： （1）保持生物产物的活性；纯度要求高； （2）当生物技术产品是食品或药物时，要求无污染物、无对映体、无病毒、无热原无致敏原； （3）从发酵液和细胞培养液中提取所需生化物质的第一步，分两部分：预处理和固液分离。 4.发酵液的成分：包含菌（细胞）体，胞内产物，胞外产物及剩余的培养基残分等。 对于胞外产物，可先将菌体或其他悬浮杂质去除，才能从澄清的滤液中提取代谢产物。 对于胞内产物，首先富集菌体，再进行细胞破碎和碎片分离，然后提取胞内产物。 5.发酵液预处理的原因： （1）液相粘度大，大多为非牛顿型流体，不易过滤，所需物质多在液相； （2）发酵产物浓度较低，大多为1-10%； （3）发酵液成分复杂，不利于提取产物。 5.预处理的目的：促进从悬浮液中分离固形物的速度，提高固液分离的效率 （1）改变发酵液的物理性质，包括增大悬浮液中固体粒子的尺寸，降低液体黏度； （2）相对纯化，去除发酵液中的部分杂质（高价无机离子和杂蛋白质），以利于后续各步操作。 （3）尽可能使产物转移进入便于后处理的一相中（多数是液相）。 6.发酵液杂质的去除：（不同杂质的去除方法：发酵液成分复杂，目标产物与各种杂质溶解在一起。这些杂质中对提取影响最大的是高价无机离子和杂蛋白。） （1）无机离子的去除：钙离子，在发酵液中加入草酸，可出去钙离子。镁离子，由于发酵液中镁离子含量通常不高，利用草酸很难完全出去镁离子。此时，可加入三聚磷酸钠，三聚磷酸钠与镁离子形成可溶性络合物，即可除去镁离子。铁离子，发酵液中的铁离子，一般用黄血岩去除，使其形成普鲁士蓝沉淀。 （2）可溶性蛋白质的去除：①盐析法；②等点沉淀法；③有机溶剂沉淀法；④其他沉淀法；⑤加热法；⑥吸附法 A.盐析法：常用中性盐，主要有硫酸铵、硫酸镁、硫酸钠、氯化钠、磷酸钠等，其中应用最多的硫酸铵。 影响盐析的因素有：a.温度：除对温度敏感的蛋白质在低温（4℃）操作外，一般可在室温中进行。一般温度低蛋白质溶解度降低。但有的蛋白质（如血红蛋白、肌红蛋白、清蛋白）在较高的温度（25℃）比0℃时溶解度低，更容易盐析；b.pH值：大多数蛋白质在等电点时在浓盐溶液中的溶解度最低；c.蛋白质浓度：蛋白质浓度高时，欲分离的蛋白质常常夹杂着其他蛋白质地一起沉淀出来（共沉现象）。因此在盐 析前血清要加等量生理盐水稀释，使蛋白质含量在2.5-3.0%。 B.沉淀法： a.等电点沉淀法：蛋白质的等电点大都在酸性范围内 pH4.0～5.5 ，调节发酵液的pH到蛋白质的等电点是除去蛋白质的有效方法。 b.酸碱调节，使蛋白质与离子形成沉淀： 在酸性溶液中，蛋白质与一些阴离子形成沉淀，如三氯乙酸盐、水杨酸盐、苦味酸盐等； 在碱性溶液中，蛋白质与一些阳离子形成沉淀，如Ag+、Cu2+、Zn2+、Fe3+等。 C.变性法：蛋白质从有规则的排列变成不规则结构的过程称为变性。变性蛋白质溶解度较小。 变性方法：a.加热；b.大幅度调节pH值；c.加酒精、丙酮等有机溶剂或表面活性剂等。 不足之处：加热法只适合于对热较稳定的目的产物；极端pH值也会导致某些目的产物失活，且要消耗大量酸碱；有机溶剂法通常只适用于所处理的液体数量较少的场合。 7.有色物质的去除：通常脱色方法为吸附法，如活性炭吸附和树脂吸附。 8.发酵液性能的改善： （1）降低发酵液的粘度：加热（温度和时间）和稀释。（麦芽汁40℃-75 ℃，粘度下降50%） （2）调解pH：①蛋白、氨基酸等电点沉淀；②减少膜的堵塞；③利于细胞、细胞碎片和胶体的絮凝。 9.凝聚和絮凝技术：凝聚和絮凝技术常用于菌体细小而且黏度大的发酵液的预处理中。 （1）凝聚是指在中性盐的作用下，由于双电层排斥电位的降低，而使胶体体系不稳定的现象。 作用机理：（1）中和粒子表面电荷；（2）消除双电层结构；（3）破坏水化膜。 絮凝是指在某些高分子絮凝剂的存在下，基于桥架作用，使胶粒形成粗大的絮凝团的过程，是一种以物理的集合为主的过程。 作用机理：架桥作用。 10.工业絮凝剂：（1）人工合成有机高分子聚合物；（2）天然有机高分子聚合物；（3）无机高分子聚合物。 11.微生物絮凝剂：包括直接利用微生物细胞的絮凝剂、利用微生物细胞壁代谢产物的絮凝剂和克隆技术所获得