沙门氏菌检测的准方法.docVIP

国际标准 ISO 6579 食品和动物饲料的微生物学 ——沙门氏菌检测的基准方法 内容 1 范围 2 参考标准 3 定义 4 原理 4.1 概要 4.2前增菌——非选择性液体培养基 4.3 增菌——选择性液体培养基 4.4 划平板和鉴定 4.5 确认 5 培养基、试剂和血清 5.1 概要 5.2 培养基和试剂 5.3 血清 6 设备和玻璃器皿 7 采样 8 检验样品的制备 9 程序 9.1 试验样品和原始悬浮液 9.2 非选择性前增菌 9.3 选择性增菌 9.4 划平板和鉴定 9.5 确认 10 结果表示 11 检验报告 12 质量保证 附录A （标准化）程序图表 附录B （标准化）培养基和试剂的成份及准备 附录C （非标准化）实验室间试验结果 参考书目 前言 ISO（国际标准化组织）是国际标准化团体））））））））））辨认沙门氏菌菌落，在很大程度上依靠经验，外表各有不同，不仅是种与种之间，每批培养基之间也有不同））.3.4 L-赖氨酸脱羧酶培养基（5.2.8）））） 附 录 B （标准化） 培养基和试剂的组织和制备 B.1 缓冲蛋白胨水 B.1.1 成份 B.1.2 制备 将上述成分溶解于水，如需要可以加热。 如需要，调节pH值，以便在消毒后25℃下pH值为7.0±0.2。 分装培养基于适当容量的烧瓶中，以便满足实验的需要。 置于高压灭菌锅中121℃灭菌15分钟。 B.2 RVS肉汤 B.2.1 溶剂A B.2.1.1 成份 B.2.1.2 制备 将上述成分溶解于水，如需要可以加热到70℃左右。 溶液在完全RVS培养基制备时应已经准备就绪。 B.2.2 溶剂B B.2.2.1 成份 B.2.2.2 制备 将氯化镁溶于水中。 由于氯化镁容易吸湿，依据相关公式，可取整个的MgCl.6H2O溶解于新开的容器内。例如，250gMgCl.6H2O加入625ml的水，得到一个总体积为788ml的溶液，MgCl.6H2O的重量浓度约为31.7g/100ml。 B.2.3 溶剂C B.2.3.1成份 B.2.3.2制备 将孔雀绿草酸盐溶于水中。 溶液置于棕色瓶中，室温保存至少8个月。 B.2.4完全培养基 B.2.4.1 成份 B.2.4.2 制备 加入1000ml溶液A、100ml溶液B、10ml溶液C。 如需要，调节pH，以便在灭菌后pH值为5.2±0.2。 使用前，用10ml量分装试管。 置高压灭菌锅中115℃灭菌15分钟。 已配好的培养基于3℃±2℃保存。隔天使用该培养基。 注 最终培养基成分是：大豆消化酶，4.5g/l；氯化钠，7.2g/l；磷酸二氢钾（KH2PO4+K2HPO4），1.44g/l； MgCl2，13.4g/l或MgCl2·12H2O，28.6g/l；孔雀绿草酸盐，0.036g/l。 B.3 MKTTn肉汤[7] B.3.1 基础培养基 B.3.1.1 成份 B.3.1.2 制备 将脱水的基础成份或基础完全培养基溶解于水中，并煮沸5分钟。 如需要，调节pH，使其25℃时值为8.2±0.2。 彻底混匀培养基。 该基础培养基于3℃±2℃可保存4周。 B.3.2 吲哚溶液 B.3.2.1 成份 B.3.2.2 制备 将碘化钾完全溶于10ml水中，再加入碘，然后加入100ml水稀释。不需加热。 在室温下将配制好的溶液置于密闭容器，暗处保存。 B.3.3 新生霉素溶液 B.3.3.1 成份 B.3.3.2 制备 将新生霉素钠盐溶于水中，过滤灭菌。 3℃±2℃保存4周以上。 B.3.4 完全培养基 B.3.4.1 成份 B.3.4.2 制备 无菌条件下，将5ml新生霉素溶液（B.3.3）加入到1000ml基础培养（B.3.1）中。混匀，然后加入20ml碘-碘化钾溶液（B.3.2）。混匀。 在无菌条件下，按实验需要量将培养基分装于灭菌好的烧瓶中。 完全培养基应隔天使用。 B.4木糖赖氨酸去氧胆酸盐（XLD）琼脂[7] B.4.1 基础培养基 B.4.1.1成份 B.4.1.2制备 将脱水的基础成份或基础完全培养基溶解于水中，加热，不停地搅拌，直至培养基开始沸腾。避免温度过高。 如需要，调节pH，以便在灭菌后25℃时pH值为7.4±0.2。 将此培养基适量倒入烧瓶中。 加热并不断搅拌，直到培养基沸腾，琼脂溶解。不要温度过高。 1）依靠琼脂的凝胶强度。B.4.2 琼脂板的制备 立即从44℃-47℃的水浴（6.5）取出，搅拌并烧平板。直到凝固。 使用前，在35℃到55℃的烘箱里小心干燥琼脂板，直到琼脂表面干燥。（若把盖子拿掉或琼脂面朝下效果更好）。 烧好的平板在3℃±2℃保存5天以上。 B.5 营养琼脂 B.5.1 成份 B.5.2 制备 将相应组份或脱水完全培养基溶于水，如需要可加热。 如需要，调节pH，以便在灭菌后25℃时pH