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第5章 核酸化学 学大纲基本要求 DNA、RNA的结构和性质以及研究技术。核酸的化学结构，碱基、核苷、核苷酸，DNA的结构,DNA的一级结构, DNA的二级结构, DNA结构的不均一性和多形性, 环状DNA, 染色体的结构。RNA的结构, RNA的类型和结构特点,tRNA的结构和功能, mRNA的结构和功能, rRNA的结构和功能。核酸的性质, 解离性质, 水解性质, 光吸收性质, 沉降特性,变性、复性及杂交。核酸研究技术,核酸的分离纯化,限制性核酸内切酶,DNA物理图谱,分子杂交,DNA序列分析,DNA的化学合成，DNA聚合酶链式反应—PCR。 二、 本章知识要点 一 核酸的化学组成 1．元素组成 核酸分子主要由碳、氢、氧、氮和磷等元素组成。与蛋白质相比较，核酸的元素组成中一般不含有硫，而磷的含量较为稳定，占核酸9％～10％。可通过测定磷含量来估计样品中核酸的含量。 2．物质组成 核酸在核酸酶的作用下水解为核苷酸，核苷酸完全水解可释放出等摩尔量的含N碱 碱基Base 、戊糖和磷酸。因此构成核酸的物质成分有三类：包括磷酸、戊糖和碱基。戊糖可分为核糖和脱氧核糖，碱基又分为嘌呤碱和嘧啶碱两类，DNA中的戊糖和碱基与RNA有所不同。 DNA分子中的戊糖是β-D-2-脱氧核糖,RNA中的戊糖是β-D-核糖。 DNA分子中存在的碱基主要有腺嘌呤 A 、鸟嘌呤 G 、胞嘧啶 C 和胸腺嘧啶 T 。 RNA分子中除含有A，G，C外，还含有尿嘧啶 U ，而不含有T。因此，DNA和RNA的碱基组成上，嘧啶的组成有所不同。在DNA和RNA分子中尚含有少量的不常见的其他碱基，称为稀有碱基，它们大多数是常见碱基的甲基化衍生物。 3．核酸的基本单位——核苷酸 组成DNA的核苷酸 nucleotide 称为脱氧核糖核苷酸，组成RNA的核苷酸称为核糖核苷酸。核苷酸则是由磷酸、戊糖、碱基组成。碱基和核糖或脱氧核糖之间脱水通过糖苷键 glycosidic bond 缩合形成核苷或脱氧核苷，戊糖的第1位碳原子与嘌呤的第9位氮原子相连构成l，9—糖苷键，而与嘧啶的第l位氮原子相连构成1，1-糖苷键。核苷中戊糖的游离羟基与磷酸之间脱水通过磷酯键缩合生成核苷酸。因核糖核苷的糖基在2＇，3＇，5＇，位上均有游离的羟基，故能分别形成2＇-3＇-或5＇-核糖核苷酸，而脱氧核糖核苷的糖基上只有3＇，5＇两个游离的羟基，所以只能形成3＇-或5＇-脱氧核糖核苷酸。生物体内游离存在的多是5＇-核苷酸。5＇-核苷酸的磷酸基上往往可以再接一分子或两分子磷酸，生成二磷酸或三磷酸核糖核苷 NDP或NTP 和二磷酸或三磷酸脱氧核糖核苷 dNDP或dNTP 。四种NTP和四种dNTP分别是合成RNA和DNA的原料。在生物体内还有一些游离的核苷酸及其衍生物，如供能物质ATP、多种激素的第二信使cAMP，cGMP等，在生物代谢过程中起重要作用。 4．核苷酸的连接方式 核苷酸之间靠3＇，5＇-磷酸二酯键彼此连接而组成多核苷酸链。即核苷酸戊糖的第5位碳上的磷酸基与另一个核苷酸戊糖的第3位碳上的羟基脱水缩合形成酯键。因一个磷酸基形成两个酯键，故称为磷酸二酯键。多核苷酸链是核酸的基本结构形式，由四种核糖核苷酸 NMP 通过磷酸二酯键连接而成的多核苷酸链为RNA链。由四种脱氧核糖核苷酸 dNMP 通过磷酸二酯键连接而成的多核苷酸链为DNA链。DNA链和RNA链都具有两个游离末端，其核苷酸残基中戊糖的5位碳上带有游离的磷酸基的一端称为5′末端，戊糖的3位碳上带有游离的羟基的一端称为3′末端。多核苷酸链是以糖—磷酸构成骨架，碱基在骨架内侧。在书写核苷酸链核苷酸残基 或碱基 排列顺序时，则从5＇→3＇方向 由左至右 描述。 （二）DNA的分子结构 核酸的分子结构大体分为三级，DNA和RNA在分子的构象和碱基组成上有着显著的差异。 1．DNA的一级结构 DNA的一级结构是指多脱氧核糖核苷酸链中核苷酸残基的排列顺序，也就是核苷酸链中碱基的排列顺序。 DNA对遗传信息的携带和传递是依靠核苷酸中的碱基排列顺序变化而实现的。自然界基因的长度在几十至几万个碱基之间，由于碱基的排列方式不同，因而提供的DNA编码能力几乎是无限的。 2．DNA的二级结构 DNA的二级结构是典型的双螺旋 double helix 结构。Watson-Crick双螺旋结构模型 B-DNA 的特征是： 1 反向平行双链：由两条长度相同、互为反向平行的脱氧多核苷酸链组成。碱基位于两条脱氧核糖和磷酸形成的长链骨架的内侧。 2 碱基互补配对：两条链通过碱基间形成的氢键相连，具有严格的碱基配对关系。始终是A与T配对、G与C配对。A，T之间形成二个氢键，G，C之间形成三个氢键。碱基对 bp 平面垂直于螺旋轴。 3 右手双螺旋：两条反向平行的脱氧核糖核酸链围