免疫组化技术总(较好-Jane-2014.01.15).docVIP

个人免疫组化感悟（Jane） 1、方法操作不难，最大的难处是出现异常结果时如何解决？ 这就需要掌握免疫组化实验原理，每一步知道为什么这样做，这样你才敢大胆地改革先前的不对的方法步骤。如抗体孵育条件主要是抗体浓度、温度、时间，这三者一般是相互成反比的（相对），其中浓度是最重要的先决条件，温度决定反应的速度、时间决定反应的量。就拿温度来说，可以有4度、室温、37度，我推荐4度最佳，反应最温和，背景较浅；而37 度反应速度较快，时间较短；室温我不太提倡，除非你每次都把环境温度控制在一定的范围，否则，尽量选择前两者。? ?2、免疫组化最大的优势是定位和定性。 相比于其他蛋白检测方法，免疫组化具有定性灵敏度高、定位较直接准确，是定位检测分析首选方法。尤其对于有些因子的转位研究十分有用。 ?3、免疫组化结果定量分析的前提是高质量的染色切片。 免疫组化结果也能定量分析，但必须是背景染色浅而特异性染色较深的情况下，分析最为准确， 这种原则可能也是我们日常审稿时判定研究结果的必备条件。 4、 阳性对照一般是用肯定表达这种抗原的切片来做；阴性对照一般是用PBS或非一抗替代一抗来进行反应，其余步骤均一致。前者是排除方法和实验系统有无问题；后者是排除有无一抗外的非特异性染色。5、免疫组化的应用广泛，是当前实验研究的最重要方法之一。 如今发SCI论文时，明显感觉仅靠量化的数据来发文章很难，加一些形态学数据或