第四章血液分析及其临床应用.docVIP

第四章　血液分析仪及其临床应用 ? 第一节　概　述 　　20世纪50年代初，电子血细胞计数仪开始应用于临床，随着电子技术、流式细胞术、激光技术、单克隆抗体、计算机等高科技在血细胞分析仪上的应用，血液分析仪的研制水平不断提高，检测原理不断完善，测量参数不断增多，现代血液分析仪（HA）具有下列特点：　　1.自动化程度越来越高。　　2.通过条形码识别、自动运输装置、自动混匀、自动进样、自动检测、自动报告、自动清洗、自动涂片，形成了模块式自动化血液分析流水线。　　3.提供参数越来越多： 能提供18～40多个参数，如有核红细胞数、淋巴细胞亚群数等。　　4.精度越来越高： 采用定容计量、定时监控、三次平均法计数、延时计数等使精密度大大提高。　　5.速度越来越快：每小时可分析50～150份样本。　　6.强大的质控功能：有自动记录质控结果、可供选择的质控规则、自动绘制质控图、失控报警、患者结果浮动均值和患者结果Delta核查和报警等功能。　　7.智能化程度越来越高：提供简明直观的直方图或散点图、提示异常结果报警信号、备有专家诊断系统和远程会诊等功能。 第二节　检测原理 　　本节要点：　　（1）电阻抗法血液分析仪检测原理　　（2）光散射法血液分析仪检测原理　　（一）电阻抗法血液分析仪检测原理　　1.电阻抗法血细胞计数原理（库尔特原理）　　将等渗电解质溶液稀释的细胞悬液置入不导电的容器中，将小孔管（也称传感器）插进细胞悬液中。小孔管内充满电解质溶液，并有一个内电极，小孔管的外侧细胞悬液中有一个外电极。当接通电源后，位于小孔管两侧电极产生稳定电流，稀释细胞悬液从小孔管外侧通过小孔管壁上宝石小孔（直径l00μm，厚度约75μm）向小孔管内部流动，使小孔感应区内电阻增高，引起瞬间电压变化形成脉冲信号，脉冲振幅越高，细胞体积越大，脉冲数量越多，细胞数量越多，由此得出血液中血细胞数量和体积值。 电阻抗原理示意图 　　2.白细胞分类计数原理　　根据电阻抗法原理，经溶血剂处理的、脱水的、不同体积的白细胞通过小孔时，脉冲大小不同，将体积为35～450fl白细胞，分为256个通道，其中，淋巴细胞为单个核细胞、颗粒少、细胞小，位于35～90fl的小细胞区，粒细胞（中性粒细胞）的核分多叶、颗粒多、胞体大，位于160fl以上的大细胞区，单核细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、原始细胞、幼稚细胞等，位于90～160fl的单个核细胞区，又称为中间型细胞。仪器根据各亚群占总体的比例，计算出各亚群细胞的百分率，并同时计算各亚群细胞的绝对值，显示白细胞体积分布直方图。 三分类血球分析仪工作原理示意图 　　3.血红蛋白测定原理　　当稀释血液中加入溶血剂后，红细胞溶解并释放出血红蛋白，血红蛋白与溶血剂中的某些成分结合形成一种血红蛋白衍生物，在特定波长（530～550nm）下比色，吸光度变化与稀释液中Hb含量成正比，最终显示Hb浓度。不同类型血液分析仪，溶血剂配方不同，所形成血红蛋白衍生物不同，吸收光谱不同，如含氰化钾的溶血剂，与血红蛋白作用后形成氰化血红蛋白，其最大吸收峰接近540nm。　　（二）光散射法血液分析仪检测原理　　1.光散射法白细胞计数和分类计数原理　　（1）激光与细胞化学法　　1）过氧化物酶检测通道　　白细胞经过氧化物酶染色后，胞质内显示细胞化学反应。过氧化物酶活性：嗜酸性粒细胞中性粒细胞单核细胞，淋巴细胞和嗜碱性粒细胞无过氧化物酶活性，此为血液分析仪白细胞分类的基础。当激光束照射到细胞时，产生不同强度的散射光，以吸光率（酶反应强度）为X轴，光散射（细胞大小）为Y轴，每个细胞根据这两个信号的不同，定位在散点图上。 各类白细胞在散点图上的位置 　　2）嗜碱性粒细胞／分叶核检测通道　　血液与酸性表面活性剂反应，不仅红细胞溶解，而且除嗜碱性粒细胞外，其他所有白细胞膜均被破坏.胞质溢出，仅剩裸核。当激光束照射到细胞时，产生不同强度的散射光，形成二维细胞图，其中，嗜碱性粒细胞呈高狭角散射，定位于细胞图上部，裸核细胞则位于细胞图下部。 嗜碱性粒细胞和分叶核粒细胞在散点图上位置 　　（2）容量、电导、光散射（VCS）法　　1）利用电阻抗法原理测量细胞体积（V）。　　2）利用电导（C）技术测量细胞内部结构。原理是利用高频电磁探针测量细胞内部结构，根据细胞核和细胞质比例、细胞内颗粒大小和密度来识别体积相同、但性质不同的两类细胞群体，如小淋巴细胞和嗜碱性粒细胞。　　3）利用光散射（S）技术测量细胞形态和核结构。原理是利用激光照射进入计数区的每个细胞，根据散射光角度（10°～70°）的不同，提供每个细胞形态、核结构信息来鉴别中性粒细胞、嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞。 五分类血球分析仪原理示意图 　　V（volume）