[参考】基于诱导多能干细胞技术的若干重大疾病模型与机理研究.DocVIP

一、研究内容 我们拟在本项目中开展一下研究内容： 1. 优化和完善建立人iPS细胞的技术体系：本研究拟对现有的iPS细胞诱导技术进行改进，构建新的非整合性细胞重编程因子表达载体，同时构建将细胞重编程因子输入体细胞的蛋白质直接运输系统及采用化合物及小分子进行输送的非病毒系统，筛选能够替代细胞重编程因子的小分子，建立并优化出高效、安全的iPS细胞诱导技术。同时，我们还将对用于诱导iPS细胞的体细胞种类进行研究，筛选出比成纤维细胞更有效、更快速地被诱导成为iPS细胞、并且易于收集的体细胞。此外，我们将对新方法建立的iPS细胞系进行安全性检验。 2. 建立若干种重大疾病特异的iPS细胞系：为了有保证后续研究疾病发病机制和筛选新的疾病治疗靶点，我们将首先建立严重危害人民健康的重大疾病的iPS细胞系，重点选择我们项目组有一定研究基础的疾病，并优先考虑具有遗传起因的家族病例，包括神经系统 （阿尔茨海默病、帕金森病和小儿脊髓性肌肉萎缩症等)重大疾病、若干其它已知单基因或多基因改变的遗传性疾病（β-地中海贫血、骨髓衰竭综合征、Y染色体微缺失和肥厚性心肌病）和目前尚不知道基因改变的重大传染性疾病（艾滋病）。当课题1建立新的方法后，我们将利用新的技术建立更多疾病患者特异的iPS细胞系。 3. 利用疾病特异的iPS细胞系研究重大疾病的发生机制：重点选择神经系统疾病 （阿尔茨海默病、帕金森病和小儿脊髓性肌肉萎缩症等)和肥厚性心肌病患者特异的iPS细胞系，以正常人iPS细胞为对照，将疾病特异性iPS细胞向相应疾病中的功能细胞定向诱导，比较正常人和患者来源的细胞在分化过程中以及在受到环境危害（如氧化应激）或过度刺激（overexcitation）情况下的形态和功能，建立研究相关疾病的模型。采用microarray或深度测序技术研究mRNA表达谱，采用ChIP-chip(seq)和MeDIP-chip(seq)技术研究表观遗传学谱，分析正常细胞和疾病细胞之间细胞编程的差异，结合蛋白组学和质谱分析，有效地将全基因组表达改变与疾病的表型变化链接起来，为揭示疾病的发生机制和发现新的药物靶点提供依据。 4. 建立基于疾病细胞模型的药物评价和筛选体系：利用以上研究建立的某些特定疾病（肥厚性心肌病和帕金森病）的细胞模型对于现有药物的疗效和剂量做出个体化的评估并筛选能使细胞表型逆转的新药。同时结合疾病的发生机制研究结果获得新的治疗靶点，筛选出针对新靶点的激活剂或抑制剂，实现对若干重大疾病的有效控制。 二、预期目标 （一）总体目标： 从解决重大疾病治疗和改善我国人民健康水平的需求出发，针对当前国际iPS细胞研究的关键问题，优化建立人iPS细胞的技术体系，实现安全有效地建立疾病特异的iPS细胞系；在此基础上建立严重危害人民健康和我们项目组有一定研究基础的若干重大疾病的iPS细胞系；掌握疾病特异性iPS细胞向相应疾病中的功能细胞定向诱导的技术方法，以此作为模型研究这些疾病的发病机制；利用以上疾病模型，对现有药物做出个体化的评估，并发现新的治疗靶点和筛选新的药物，为这些重大性疾病的基础和临床研究开辟新的研究方法和技术平台。通过本项目的实施使我国在干细胞研究领域达到或领先国际水平。同时，以本项目为纽带，促进多学科、多院校的衔接和交流，尤其是基础研究与临床实践的密切结合，培养出一批优秀的干细胞研究人才。 （二）五年预期目标 1. 优化和完善建立人iPS细胞的技术体系：包括1）通过非病毒或非基因组整合载体将重编程因子导入体细胞； 2）发现诱导多能干细胞产生的小分子化合物或新的细胞调控因子；3）筛选出可以被更有效、更快速地诱导成为iPS细胞、并且易于获得的体细胞种类，为建立患者特异的iPS细胞系提供平台。 2. 建立包括神经系统疾病 （阿尔茨海默病、帕金森病和小儿脊髓性肌肉萎缩症等)、若干其它已知单基因或多基因改变的遗传性疾病（β地中海贫血、骨髓衰竭综合征、Y染色体微缺失和肥厚性心肌病）和目前尚不知道基因改变的重大传染性疾病（艾滋病）等疾病患者特异的iPS细胞系。 3. 诱导正常人和患者特异的iPS细胞向有特定功能的细胞分化，应用分子生物学、细胞生物学、生物物理等多种手段发现疾病细胞表型，建立可供研究的阿尔茨海默病、帕金森病、小儿脊髓性肌肉萎缩症和肥厚性心肌病的疾病细胞模型。 4. 利用以上研究中建立的疾病模型，重点选择肥厚性心肌病和帕金森病，筛选能逆转疾病表型的新药。同时，基于疾病发生机制研究中发现的可望获得重大疾病治疗的新靶点，筛选针对这些新靶点的化合物，为改善疾病的症状开辟新的途径。 5. 取得具有国际影响的原创性成果，在国际重要学术刊物上发表高水平论文30篇以上。其中，在影响因子大于5的刊物发表15篇以上。培养一批从事干细胞研究的基础研究与临床应用结合的优秀人才。 三、研究