第三章细胞破碎汇编.ppt

通用性差； 时间长，效率低，一般胞内物质释放率不超过50%； 有些化学试剂有毒 。 化学渗透法优点： 缺点： 对产物释放有一定的选择性，可使一些较小分子量的溶质 如多肽和小分子的酶蛋白透过，而核酸等大分子量的物质 仍滞留在胞内； 细胞外形完整，碎片少，浆液粘度低，易于固液分离和进 一步提取。 值得一提的是，除了应研究破碎细胞的方法外，还应研究在生物合成过程中减低细胞牢固程度的方法。 三、目标产物的选择性释放 目标产物在细胞内的位置： 细胞质内 细胞器内 细胞膜或细胞壁附近（如革兰氏阴性菌周质空间中的蛋白） 细胞膜或细胞壁处于结合状态 选择性释放：使细胞不完全破碎，选择性释放目标产物，尽量减少其他物质的释放。 选择性释放原则： 仅破坏或破碎存在目标产物的位置 细胞膜附近：温和的方法(酶法)，或采用较温和的机械破碎条件，降低细胞破碎程度。 细胞内：机械破碎 选择性溶解目标产物 目标产物与细胞膜或细胞壁处于结合状态 调整溶液pH、离子强度、添加能够溶解释放目标产物的试剂(如表面活性剂、螯合剂)。 化学渗透法选择性释放胞内产物流程图 四、破碎率的测定 a. 直接测定 利用显微镜观察或计数；染色可将破碎细胞和完整细胞区分开。 如革兰氏染色能将破碎后的革兰氏阳性菌染成阴性菌的颜色；