酚-氯仿法从全血中分离DNA步骤.docVIP

酚-氯仿法从全血中分离DNA 一、所需溶液： 1 PBS缓冲液 NaCl 8 g KCl 0.2 g Na2HPO4 1.44 g KH2PO4 0.24 g 加超纯水定容至1000 mL，调pH至7.4，高压灭菌。DNA抽提液6057 g 10 mmol/L EDTA / MW 372.24 18.612 g 0.1 mol/L SDS / MW 288.38 2.5 g 0.5% 加超纯水定容至500 mL高压灭菌使用前放至37水浴中，使之完全溶解。 蛋白酶K20 mg/mL ?20 ℃保存 5 氯仿 6 无水乙醇 用前?20 ℃保存 8 TE缓冲液 Tris / MW 121.14 0.6057 g 10 mmol/L EDTA / MW 372.24 0.1861 g 1 mmol/L 加超纯水定容至500 mL高压灭菌 所需主要仪器设备 制冰机，冰箱，冷冻低温超速离心机，移液器，恒温水浴箱 三、操作步骤 1、冰冻的血样在室温水浴中融化； 2、将1 mL全血转入一个无菌的2 mL离心管中； 3、加入等体积（1 mL）的PBS缓冲液，温和摇动15 min； 4、室温3500 g离心10 min； 5、用移液器弃上清，重复步骤3、4至上清液透明，沉淀无色； 6、离心管中加DNA提取液1 mL，温和摇动