显微镜的使用和生物鉴定.doc

下次仍要带预习报告来，概括的写就可以了，目的、原理、构造、使用操作步骤写写就可以了。本周二督导来查过，下周有可能还要来。 实验 一、实脸目的 了解普通生物显微镜的分类、构造、工作原理及普通生物显微镜的使用、维护方法。二、基本原理 微生物学研究用的显微镜通常有低倍物镜（1610×）、高倍物镜（440-45×）和油镜（l8 mm，95-100×）三种。油镜常在镜筒外标有白圈，它是三者中放大倍数最大的。 使用油镜时，油镜与其他物镜的不同是载玻片与接物镜之间，不是隔一层空气，而是隔一层油质，称为油浸系。这种油常选用香柏油，因香柏油的折射率n = 152与玻璃基本相同。当光线通过载玻片后，可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射。如果玻片与物镜之间的介质为空气，则称为干燥系；当光线通过玻片后，受到折射发生散射现象，进入物镜的光线显然减少，这样视野的照明度就减低了（图l ）。 图1 接物镜和标本之间不同折射率时的光线通路（A：空气，B ：香柏油） 显微镜的分类：目前，显微镜根据结构和原理不同主要分为光学显微镜和电子显微镜，它们中又分成几种类型。光学显微镜有明视野显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜、偏光显微镜和立体显微镜等。明视野显微镜普通生物显微镜 暗视野显微镜利用特殊的集光器，不使被照射物体的光线直接射入物镜，我们看到的是检测物体表面散发的散射光而观察到物体，所以实际是在暗视野中见到明亮的物象。这样可以观察比较透明的活的微生物，省去染色等步骤，能比较清楚的观察微生物的形态。相差显微镜人眼能观察物体主要是物体所散发出的光线，光具有波粒二相性。波长对应的是颜色，振幅对应亮度。普通生物显微镜观察物体时的染色就是改变被观察物体的波长。但染色时，通常会破坏微生物内部的结构，如果不染色，它有时无法和它周围环境相区分。我们利用透明物体不能改变波长和振幅，但能改变相位的特性，相差显微镜把光线分解成直射光和衍射光，使之相互干涉，即能区分明暗，观察到物体。荧光显微镜一一主要用于微生物内部结构的观察。一般通过荧光染色剂使特殊结构在特殊光源下发光，以便观察。倒置显微镜主要用于观察需要进一步生长的活的微生物或动植物细胞。电子显微镜利用光线波长的变化，主要用于观察微生物内部的结构。三实验器材1．仪器普通生物显微镜2．材料标本片、香柏油、二甲苯、擦镜纸。四操作步骤和内容1．普通生物显微镜的一般构造光学显微镜的基本结构如图2，都可分为光学系统和机械系统两大部分，只有在光学和机械二系统良好的配合下才能发挥显微镜的性能，因此要正确掌握显微镜的用法，必须了解显微镜的结构和原理。 机械部分镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、推进器、粗调（10m圈）、微调（0/圈）光学部分反光镜、聚光镜、光圈、物镜（）、目镜（5、10、16），较好的显微镜还有光源。座是显微镜的基座，使显微镜能平稳地放置在桌子上。物台是放置标本的地方，通常为方形或圆形。镜台上有压片夹用的固定被检标本，较好的显微镜则有标本移动器，转动螺旋可使标本前后和左右移动。有的标本移动器带有游标尺，可指明标本所在位置。镜臂用以支持镜筒，也是移动显微镜时手握的部位。 目镜和物镜的金属筒。镜筒上端插入目镜，下端与物镜转换器相接。安装在镜筒的下端，其上装有35个不同放大倍数的物镜，可以通过转动物镜转换器物镜。 安装在镜臂基部，是调节物镜与被检标本距离的装置，通过转动粗、细调节螺旋便可清晰地到标本。一般由两块透镜组成。上面一块称接目透镜，下面一块称场镜。在两块透镜中间或场镜的下方光阑。在进行显微测量时，接目测微尺便要放在视场光阑上．不同的目镜上刻有5、10、15或20等字符以表示该目镜的放大倍数。可根据需要选择适当的目镜使用。物镜是显微镜中很重要的光学部件，由多块透镜组成。根据物镜的放大倍数和使用方法的不同，分为低倍物镜、高倍物镜和油镜三类，低倍物镜有4、10、20。高倍物镜有40和45等。油镜有90、95和100等。 安装在镜台下，是由多块透镜构成，其作用是把平行的光线聚焦于标本上，增强照点必须在正中，使用聚光镜上的调节器可以进行调中。通过转动手轮调节聚光镜的上下，以适应使用不同厚度的载玻片，也能保证焦点落在被检标本上。但因聚光镜的焦距短，载破片也不能太厚，一般以。聚光镜上附有虹彩光阐（俗光圈），通过调整光阑孔径的大小，可以调节进入物镜光线的强弱。反光是普通光学显微的取光设备，使光线射向聚光镜、它一面是凹面镜，另一面是平面镜。有聚光镜的显微镜，无论使用低倍或高倍物镜均应用平面镜，只在光量不足时才使用凹面镜。没有聚光镜的显微镜，低倍物镜时用平面镜，高倍物镜及油镜均用凹面镜。光源是较好的光学显微镜自身带有的照明装置，安装在镜座内部，由强光灯泡发出的光线通过安装在