生化实验-血糖的测定分解.ppt

血糖的测定 实验四 血糖及血糖水平的概念： 血糖：指血液中的单糖：葡萄糖 血糖水平：血浆中葡萄糖浓度 血糖总维持在恒定水平： 3.9~6.7mmol/L 调节血糖水平的激素：胰岛素、胰高血糖素、糖皮质激素和肾上腺素。 血糖水平异常：⑴高血糖及糖尿病；⑵低血糖 临床：血糖检测是目前诊断糖代谢异常相关疾病的主要依据。 科研：在代谢疾病的研究中，常测定血糖。在某些药物的研究中，也涉及血糖的测定。 测定血糖的意义 测定方法 无机化学法： Folin-Wu法 有机化学法：邻甲苯胺法 酶法：葡萄糖氧化酶法 血糖测定的常用方法 葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法原理 （1）葡萄糖＋O2＋H2O （2）H2O2＋4-氨基安替吡啉＋苯酚 葡萄糖酸＋H2O2 葡萄糖氧化酶（GOD） H2O ＋红色醌式物质 过氧化物酶 （POD） Trinder反应 505nm 光吸收法测定 相对血糖浓度 分光光度计的工作原理 朗伯-比尔定律 朗伯定律：A=k1L 比尔定律：A=k2C 朗伯-比尔定律：如同时考虑液层厚度和溶液浓度对吸光度的影响，则吸光度与溶质的浓度和溶液的厚度的乘积成正比。 A=KLC 朗伯-比尔定律应用 A标=KC标L A样=KC样L 标准品法测定未知样品含量 C样= A样 A标 × C标 1. 接通电源，调整波长。 2. 比色杯中加入空白及待测样品，并放入分光光度计中，注意：加入样品量不超过比色杯体积的2/3。 3. 调模式为“透射比”，对空白对照进行调“0”（开盖）和调“100”（闭盖）。 4. 调模式为“吸光度”，将空白对照调“0”，测定待测样品的吸光度值。 分光光度计的使用 葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法检测激素对血糖浓度的影响 方法 （1）取4支试管，按下表加入试剂: 试剂 标准管(ml) 测定管1(ml) 测定管2(ml) 空白管(ml) 血清样品 – 0.02 0.02 – 葡萄糖标准液 0.02 – – – 蒸馏水 – – – 0.02 酶酚混合试剂 3.00 3.00 3.00 3.00 实验步骤： 充分混匀，37℃ 水浴中保温20min； 冷却至室温后，505nm处比色 比色方法：以空白管调零，读取标准管及测定管光密度值。 （2）计算： 依据朗伯-比尔定律： A=KLC 标准管葡萄糖浓度：5mmol/L 测定管葡萄糖含量（mmol/L） ＝ 测定管光密度 标准管光密度 ×5 正确使用比色器皿：手拿比色皿的毛面；比色液应占比色皿的2/3。 血糖测定应在取血后2小时内完成，放置太久，血糖易分解，故使含量降低。 酶酚混合液一般现用现配。 注意事项 小结 1、葡萄糖氧化酶-过氧化物酶比色法测定血糖的原理。 2、分光光度计的正确使用。 3、实验操作中存在的问题。 * 方法评价： 此方法特异性高、准确、简便，还可用于自动分析仪 * 方法评价： 此方法特异性高、准确、简便，还可用于自动分析仪