10cDNA和基因组文库DNA的构建汇总.ppt

第九章? cDNA文库和基因组文库构建 　　　基因组文库是含有某种生物体全部基因的随机片段的重组DNA克隆群体；cDNA文库是指含有所有重组cDNA的克隆群体。 ? 　　基因组文库：来源于基因组DNA，反映基因组的全部信息，用于基因组物理图谱的构建，基因组序列分析，基因在染色体上的定位，基因组中基因的结构和组织形式等。 　　　cDNA文库：来源于细胞表达出的RNA，反映基因组表达的基因序列信息，用于研究特定细胞中基因的表达状态和表达基因的功能等。? 基因文库＝基因组文库＋cDNA文库 二、cDNA文库的构建 分为六个阶段： 阶段1：反转录酶催化合成cDNA第一链 阶段2：cDNA第二链的合成 阶段3：cDNA的甲基化 阶段4：接头或衔接子的连接 阶段5：Sepharose?CL-4B凝胶过滤法分离cDNA 阶段6：cDNA与λ噬菌体臂的连接  1：反转录酶催化合成cDNA第一链  1 . 1.在置于冰上的无菌微量离心管内混合下列试剂进行cDNA第一链的合成： poly(A)?RNA?(1μg/μl)?10μl 寡核苷酸引物(1μg/μl)?1μl 1mol/L?Tris-HCl?(pH8.0,?37℃)?2.5μl 1mol/L?KCl?3.5μl 250?mmol/L?MgCl2?2μl dNTP溶液（含4种dNTP，每种5mmol/L