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各位老师出的习题粗略整合 韩斌 如何完成高等植物基因组的精确测序？ 基因组测序的方法有两种： 克隆步移法（BAC-by-BAC strategy） 克隆步移法的步骤主要如下： 首先要构建遗传图，再利用几套高度覆盖的大片段基因组文库（现在主要采用的是BAC和PAC构建文库）获得精细的物理图，选择合适的BAC或PAC克隆，再构建亚克隆库（sub-clone library）进行测序，最后利用计算机对序列进行装配。 要完成精确的测序，构建精细的物理图是基础。这就要求构建高覆盖率的BAC或PAC基因组文库。将全基因组DNA部分酶切，电泳选取130Kb片段，建立BAC库，然后根据酶切指纹图等方法建立物理图谱。根据BAC序列的重叠关系，将大片段的克隆在染色体上定位好，由相互关联，部分重叠的BAC克隆连成大的重叠群（contig）。Contig中的每个BAC克隆都分别用超声波破碎打断产生2~4kb的片断构建亚克隆库，使之产生10倍的测序冗余程度的亚克隆重叠群。对此亚克隆库进行测序，序列组装以完成相应BAC克隆序列。BAC内部的空洞（gap）可以利用设计引物进行PCR等手段填补。完成所有BAC克隆序列后，便可将重叠群中的BAC克隆组装起来，完成整个染色体的精细物理图。应用最新发展的高通量测序方法包括454测序技术和solexa测序技术，可大大缩短测序周期。 测序的速度的较慢，要构建BAC库耗费大量