HIV基因的复制和逆转录技术总结.ppt

Doc.Huang 问题讨论？？？ HIV基因组的复制过程？（参考章节：DNA的生物合成、RNA的生物合成） 逆转录如何导致HIV基因突变？HIV基因突变的生物学意义？（参考章节：DNA的生物合成） 首先了解下： HIV的基因组结构及功能 一、 HIV的基因组结构及功能 HIV基因组为单股正链RNA二倍体，每条RNA链长约9.8kb，两条链的5’端借氢键形成二聚体。与其他逆转录病毒相同，HIV的基因结构从5’端到3’端依次为5’LTR-gag-pol-env-3’LTR。5’端有帽状结构m7G5ppp5GmpNp，3’端有polyA序列。除三个编码结构蛋白的基因gag、pol、env外，HIV还有较其他逆转录病毒更多的调节基因（regulatory gene）和附加基因(accessory gene)，其编码的的调节蛋白在病毒的整个感染及复制过程中具有非常重要的作用，目前已发现至少有7种：tat、rev、nef、vpr、vpu、vpx和vif。 1．长未端重复序列： HIV基因组两端的长未端重复序列（long terminal repeat, LTR）不编码病毒产物，对于病毒基因表达的起始和调节至关重要，其上有许多细胞转录因子的结合位点，可分为调节单位、核心转录单位和反式激活效应元件单位（TAR）三个不同的调控功能区。 2． Gag基因： gag基因能编码约500个氨基酸组成的聚合前体蛋白，经蛋白酶水解形成P17，P24核蛋白，使RNA不受外界核酸酶破坏。 gag基因编码几种病毒核心蛋白（衣壳蛋白） 3． Pol基因： Pol基因编码聚合酶前体蛋白，经切割形成蛋白酶、整合酶、逆转录酶、核糖核酸酶H，均为病毒增殖所必需。 pol基因编码3种酶：反转录酶、蛋白酶和整合酶 4． Env基因 env基因编码约863个氨基酸的前体蛋白并糖基化成gp160，gp120和gp41。gp120含有中和抗原决定簇，已证明HIV中和抗原表位，在gp120 V3环上，V3环区是囊膜蛋白的重要功能区，在病毒与细胞融合中起重要作用。gp120与跨膜蛋白gp41以非共价键相连。gp41与靶细胞融合，促使病毒进入细胞内。实验表明gp41亦有较强抗原性，能诱导产生抗体反应。 env基因编码插入病毒外膜磷脂双层中的糖蛋白。 其他调节基因和附加基因 5．TaT 基因编码蛋白可与LTR结合，以增加病毒所有基因转录率，也能在转录后促进病毒mRNA的翻译。 6．Rev基因产物是一种顺式激活因子，能对env和gag中顺式作用抑制序去抑制作用，增强gag和env基因的表达，以合成相应的病毒结构蛋白。 7．Nef基因编码蛋白P27对HIV基因的表达有负调控作用，以推迟病毒复制。该蛋白作用于HIv cDNA的LTR，抑制整合的病毒转录。可能是HIV在体内维持持续感集体所必需。 其他调节基因和附加基因 8．Vif基因对HIV并非必不可少，但可能影响游离HIV感染性、病毒体的产生和体内传播。 9．VPU基因为HIV-1所特有，对HIV的有效复制及病毒体的装配与成熟不可少。 10．Vpr基因编码蛋白是一种弱的转录激活物，在体内繁殖周期中起一定作用。 二、 DNA的反转录合成 （Reverse transcription） 中心法则： 反转录病毒： RNA病毒，含有反转录酶 反转录：在反转录酶的作用下以RNA为模板合成DNA的过程。 反转录酶：以RNA为模板指导三磷酸脱氧核苷酸合成互补DNA（cDNA）的酶 1、反转录酶以tRNA为引物合成双链cDNA RNA指导的DNA聚合酶活性； DNA指导的DNA聚合酶活性； RNAse H的活性（是指它能够从5??3?和3??5?两个方向水解DNA-RNA杂合分子中的RNA）。 然而：反转录酶中不具有3′→5′外切酶活性，因此没有校正功能 问题4： HIV基因组的复制过程？ HIV的复制.swf 简单地重温下HIV感染的过程 1、吸附及穿入 HIV-1感染人体后，病毒选择性的吸附于靶细胞的CD 4受体上，病毒包膜发生构象改变，外膜糖蛋白gp120的V3区与宿主细胞的CCR5或CXCR4结合，引起跨膜糖蛋白gp41区段HIV-1感染人体后，病毒选择性的吸附于靶细胞的CD 4受体上，病毒包膜发生构象改变，外膜糖蛋白gp120的V3区与宿主细胞的CCR5或CXCR4结合，引起跨膜糖蛋白gp41区段与靶细胞膜上的融合结 构域发生融合，使病毒核衣壳穿入宿主细胞。 与靶细胞膜上的融合结 构域发生融合，使病毒核衣壳穿入宿主细胞。 2、脱衣壳和逆转录 病毒进入细胞后包裹在病