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3/26/2011 韩景田 色谱分析法 平面色谱法 第五章 平面色谱法 第一节 概 述 1938年俄国人首先实现了在氧化铝薄层上分离一种天然药物。1965年德国化学家出版了“薄层色谱法”一书，推动了这一技术的发展。 因TLC法设备简单，分析速度快，分离效率高，结果直观，很快被用作定性和半定量的方法。 70年代中后期发展了高效薄层色谱。80年代以后发展了薄层色谱光密度扫描仪，和各步操作的仪器化，并实现了计算机化。 第五章 平面色谱法 定义：平面色谱法(plane chromatography)是在平面上进行分离的一种色谱方法。 一、平面色谱法的分类和原理 分类 纸色谱法：滤纸为载体，纤维素的羟基与水结合形成液-液分配色谱固定相，展开剂由于毛细作用沿滤纸向上运动。---分配色谱 薄层色谱法：将吸附材料均匀固定在载板上，由于吸附剂颗粒间的毛细作用，展开剂（流动相）上行。 -----吸附色谱 薄层电泳法：荷电组分样品负载于惰性支持介质（纸、纤维素、聚丙烯酰胺凝胶等），在电场作用下进行分离。 二、平面色谱法的基本流程 确定样品的预处理方法 选择吸附剂和展开剂 制备层析用薄板 点样 层析分离 显色 定性或定量分析 分析结果，给出结论 三、平面色谱法参数 （一）定性参数 1. 比移值Rf (retardation factor; Rf) 溶质移动的距离与流动相移动距离之比 Rf范围： 0 Rf 1 Rf = 0.2~0.8（常用） Rf = 0.3~0.5（最佳） L 2. 相对比移值Ris 讨论 参考物与被测组分在完全相同条件下展开 可以消除系统误差，大大提高重现性和可靠性； 参考物可以是后加入纯物质，也可是样品中已知组分 相对比移值Ris与组分、参考物性质及色谱条件有关，范围可以大于或小于1 （二）面效参数 1、理论塔板数 N=16(ds/W)2 ds:原点到斑点中心的距离 W：组分斑点的纵向宽度 2、塔板高度 H=ds/N=(Rf L)/N ds：原点到展开剂前沿的距离 N越大，H越小。 （三）容量因子k’与比移值Rf的关系 容量因子： k’=ts/tm ts 、 tm 分别为组分在固定相和展开剂中的保留时间 保留值的定义： （四）分离参数 1、分离度(resolution; R) 两相邻斑点中心的距离与两斑点平均宽度的比值 R=2(ds2-ds1)/(W1+W2) =2d/(W1+W2) ds1 、ds2 :分别为原点至两半斑点中心的距离， W1、W2斑点的宽度。 2.分离数(separation number; SN) 定义：相邻斑点分离度为1.177时，在Rf=0(原点)到Rf=1(溶剂前沿)之间能容纳的色谱斑点数。 W(1/2)0, W(1/2)1为实验测得的某组分色谱峰的半峰宽对ds作图外推至在原点处和溶剂前沿处的半峰宽。 一般薄层板的分离数为 7~10，高效薄层板可达10~20。SN是衡量分离容量的重要参数。 第二节 薄层色谱法 一、主要类型 二、吸附剂与展开剂 三、操作方法 四、定性与定量分析 五、高效薄层色谱法 六、薄层扫描法 七、应用实例 概述 1．TLC定义：将固定相均匀涂布在表面光滑的平板上， 形成薄层而进行色谱分离和分析的方法 2．操作过程： 铺板 →活化 →点样 → 展开 →定位(定性)/洗脱(定量) 3．分离机制：吸附* 、分配*、离子交换、空间排阻 4．特点；分离能力强、灵敏度高、展开时间较短、显色 方便。 5．应用：药物杂质检查、纯度测定、定性及定量等。 一、主要类型 （一）吸附薄层色谱 固定相为吸附剂的薄层色谱。利用吸附剂对不同组分的吸附能力差异而实现分离.经过吸附、解吸、再吸附、再解吸……最后混合物得到分离.K大，Rf值小，移动慢；K小，Rf大，移动快。 （二）分配薄层色谱 固定相为液体，吸留在载体上的薄层色谱。利用被分离组分在固定相与流动相中的分配系数不同而被分离。常用的是反相薄层色谱法，固定相是烷基化学键合相，展开剂是水及与水相溶的有机溶剂。 二、吸附剂与展开剂 (一）吸附剂 1. 硅胶：硅胶H------不含黏合剂 硅胶G------含煅石膏（13-15%） 硅胶F254--- 既含煅石膏，