乳糖操纵子概述.doc

原核生物基因表达转录水平调控之乳糖操纵子模型 (2012-07-13 00:37:45) 转载▼ 原核生物基因表达在转录水平上的调控最经典学说是操纵子学说。 一、操纵子 细菌基因表达调控的许多原理是在研究E.coli乳糖代谢调节时被发现的。法国巴斯德研究院的Francois Jacob与Jacques Monod于1960年在法国科学院院报(Proceeding of the　French Academy of Sciences)上发表了一篇论文,提出乳糖代谢中的两个基因被一靠近它们的遗传因子所调节。这二个基因为β半乳糖苷酶(β-galactosidase)和半乳糖苷透过酶(galactoside penmase)。前者能水解乳糖成为半乳糖和葡萄糖,后者将乳糖运输到细胞之中。在此文中他们首先提出了操纵子(operon)和操纵基因(operator)的概念,他们的操纵子学说(theory of operon)使我们得以从分子水平认识基因表达的调控,是一个划时代的突破,因此他们二人于1965年荣获诺贝尔生理学奖。 Jacob与Monod所提出的关于基因表达调控的操纵子学说可以简述如下:　有一个专一的阻遏分子(蛋白质)结合在靠近β半乳糖苷酶基因上面,这段DNA他们称之为操纵基因。由于阻遏分子结合在DNA的操纵基因上,从而阻止了RNA聚合酶合成β半乳糖苷酶的mRNA。此外,他们还指出乳糖为诱导物,当乳糖结合到阻遏分子上时,即阻止阻遏分子与操纵基因的结合。当有乳糖时,阻遏分子即失活,mRNA就可以转录出来。如果去掉乳糖时,阻遏分子又恢复其活力,与操纵基因DNA结合,将乳糖基因关闭。 二、乳糖操纵子 /fzswx/knowledge/knowledge01.asp?zsdBianhao=060302 /s/blog_4b07ffbc01016v21.html 乳糖操纵子(lac operon)是原核生物中研究得最清楚的一种操纵子。在乳糖操纵子上,除去β半乳糖苷酶(Z)和半乳糖苷透过酶(Y)基因之外,还有一个硫半乳糖苷转乙酰酶(thiogalactoside transacytylase)基因(A)它的生理功能尚不清楚)。这3个基因每个前面都有一翻译信号,引导核糖体结合及蛋白质合成。在底物乳糖不存在时,lac操纵子基因即被阻遏,β半乳糖苷酶只以很少的拷贝存在(每个细胞几个分子)。Jacob与Monod发现,操纵基因或一称为i(或I)的基因的突变会引起lac操纵子基因产物的合成。当i基因失效时,将一有功能的i基因引人细胞的另一DNA分子上阻遏作用可能恢复。这表明:基因编码一个可扩散的分子,引起基因的阻遏。以后这种分子被证明为蛋白质,现在称之为阻遏蛋白(repressor)即上文所说的阻遏分子。阻遏作用并不是绝对的,即使在阻遏情况下,每个细胞也有少数拷贝的β半乳糖苷酶及半乳糖苷透过酶。 当供给细胞以乳糖时,lac操纵子即被诱导,一个诱导物分子结合在阻遏蛋白的特异部位上,引起阻遏蛋白构象的改变,结果使阻遏蛋白从操纵基因上解离下来。在此系统中的诱导物并非乳糖本身,而是乳糖的同素异形体,称为异乳糖(allolactose)。乳糖进入E.coli细胞,被转化成异乳糖。异乳糖与阻遏蛋白结合后,它们即从操纵基因上解离下来,lac操纵子基因即开始表达,β半乳糖苷酶的浓度可以增加1000倍之多。 　　有些结构上与异乳糖相似的β半乳糖苷也是β半乳糖苷酶的诱导物,但并非它的底物。而某些β半乳糖苷为底物,却非诱导物。异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl thiogalactoside,简称IPTG)是一种特别有效的诱导物,目前在基因表达的研究中常常使用,在基因表达的系统中加入IPTG之后,基因的表达量常成倍地增加。IPTG不是乳糖代谢的底物,属于非代谢诱导物。 　　在所有E.coli的启动子中转录起始部位之前的第35及第10核苷酸(画框处)都是高度保守的,这两个区域的突变都对转录有明显的影响,突变成单核苷酸或成对的改变,也可能是缺失：　 　　　　　　　　　　　←－－－－－－启动子区－－－－－－→ 　转录起始部位 　　5…AGTTAGTGTATTGACATGATAGAAGCACTCTACTATATTCTCAATAGGTCCACGG…3 　　　　　　　　　　　　－35区　　　　　　　　　　　－10区 三、乳糖操纵子的正调控 起初我们认为乳糖操纵子仅仅处于乳糖阻遏物的负控制之下,但是现在了解到,即使有诱导物存在将阻遏蛋白中和,操纵子的正常表达还必须有一个蛋白质介导的正调控信号。在研究葡萄糖怎样阻断许多种操纵子(葡萄糖敏感操纵子glucose-sensitive operons)的功能时,发现了这种正调控蛋白的存在,每一种正调控蛋白控制一种糖