牛分枝杆菌MPB83基因的原核表达及.docVIP

牛分枝杆菌MPB83基因的原核表达及 免疫活性分析* 中国生物工程杂志China Biotechnology, 2005, 25(11):76～80 张秀华1,2刘思国1**王春来1郭设平1郭洋3邵美丽4宫强1彭永刚1沈国顺3 （1 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所哈尔滨1500012 中国农业科学院特产研究所吉林132109） （3 沈阳农业大学畜牧兽医学院沈阳110161 4 东北农业大学动物医学院哈尔滨150030） 摘要利用PCR技术，以牛型分枝杆菌(M.bovis) Vallee菌株的全基因组DNA为模板，扩增出了一条600bp的MPB83基因片段，将其克隆至pMD18T载体中，经核苷酸序列测定确证后，KpnI/EcoRI双酶切，然后亚克隆到原核表达载体pET30a的相同酶切位点，构建表达质粒pETMPB83，将鉴定的重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3 ), IPTG诱导后SDSPAGE检测表达情况，重组质粒pETMPB83在30kDa处有一特异表达带，与预计大小相符。经Ni柱纯化后，Western blot检测纯化蛋白具有免疫活性,用纯化的该蛋白进行动物（兔）接种制备抗血清，用Western blot和ELISA检测该抗血清的效价和特异性，结果表明特异性较好。 关键词牛分枝杆菌MPB83基因原核表达Western blot抗血清ELISA 收稿日期