DEAE—离子交换剂纯化血清IgG-160524.docVIP

DEAE—离子交换剂纯化血清IgG DEAE-纤维素（Diethylaminoethyl-cellulose，DEAE）是在纤维素上引入二乙基氨基乙基，属于弱碱型阴离子交换剂。吸附蛋白质的最适pH范围为7～9，pH超过9.5，DEAE基团则不解离带电荷。每克DEAE含0.96～1.24mmol/L可解离基团，与蛋白质的交换量可75-122mg/100mgDEAE。 应用离子交换剂来纯化物质，可以是把要纯化的物质成分交换吸附于离子交换剂上，然后再分别洗脱下来获得纯品，或者把不需要的成分吸附于离子交换剂上，需要的成分直接流出，得到纯品。本实验采用DEAE-纤维素层析柱纯化血清IgG，利用pH6.7的缓冲液溶解样品IgG，此时IgG粗物中除IgG外，其他杂蛋白均带上不同数量的负电荷，可以和DEAE上的阴离子发生交换吸附于柱上。IgG因不解离带电，而不发生交换吸附，利用此特点，让溶解后的样品流过DEAE纤维素柱，即可直接收集到较纯的IgG。 （一）试剂及器材 1. 0.0175mol/L， pH6.7，磷酸盐缓冲溶液 2. 奈氏试剂。 3. 20%（W/V）磺基水杨酸溶液。 4. 1cm×50cm 5. 黑、白比色磁盘。 （二）操作步骤 1．活化 根据所需层析柱的柱床体积计算所需DEAE的用量，称取所需DEAE用蒸馏水浸泡过夜，其间换几次水，每次除去细小颗粒。抽干，改