HPLC---肖尚,SC11008004.docVIP

HPLC的原理 肖尚 S亲和色谱：亲和色谱法，其独特分离机制是基于生物结合特异性。亲和色谱是利用偶联了亲和配基的亲和吸附介质为固定相来亲和吸附目标产物, 使目标产物得到分离纯化的液相色谱法。亲和色谱中涉及到的亲和作用都是非均相反应，而且常常是多元体系，另外生物大分子的空间取向及运动方式也对其亲和作用有重要影响。（来之文献1） .反相色谱：吸附色谱的作用机制认为溶质在固定相上的保留主要是疏水作用，在高效液相色谱中又被称为疏溶剂作用。根据疏溶剂理论，当溶质分子进入极性流动相后, 即占据流动相中相应的空间，而排挤一部分溶剂分子。当溶质分子被流动相推动与固定相接触时，溶质分子的非极性部分或非极性因子会将非极性固定相上附着的溶剂膜排挤开，而直接与非极性固定相上的烷基官能团相结合吸附形成缔合络合物，构成单分子吸附层。这种疏溶剂的吸附作用是可逆的, 当流动相极性减少时，这种疏溶剂斥力下降，会发生解缔，并将溶质分子解放而被洗脱下来。（来之文献2） 离子交换色谱：离子交换色谱主要是利用分离物在离子交换树脂上的交换能力的不同（取决于分离物的电离程度和带电性质），当混合液通过离子交换树脂色谱柱时，在树脂上各中分离物中交换能力最强的把交换能力最弱的洗脱下来，整个柱子都被这种交换能力最强的物质饱和，此时用适当洗脱液洗脱，就会得到该物质的单组份溶液。（来之文献3） 凝胶过滤：。HPLC按分离机理的不同而分为几种类型，其中凝胶过滤色谱）是采用一定孔隙、并键合了亲水基团的凝胶作为色谱柱填料，根据溶液中大小不同的溶液分子进入一定孔隙填料的程度不同而使之分离。大分子先出来，小分子后出来。（来之文献4） 疏水作用：疏水作用色谱是利用样品中各组分不同的疏水性质来进行分离的方法，主要分离对象为蛋白质。固定相表面呈弱疏水性，流动相为高离子强度盐溶液，在这样的两相条件下，蛋白质分子中疏水部分与弱疏水性固定相表面的作用力增大而被吸附。逐渐降低流动相的离子强度，蛋白质按其疏水性的大小被依次洗脱，疏水性小的先洗脱，疏水性大的后洗脱。（来之文献5） 参考文献 张津辉，蒋中华等.亲和色谱法的进展.CHINESE JOURANAL OF CHROMATOGRAPHY,1999,05,第十七卷第三期 刘桂洋，毛香菊等.反相高效液相色谱的基本原理及其应用.宁波化工，2008年第三期 施跃峰.氨基酸的离子交换“过滤色谱”分离.中国色谱报，1993，第11卷第3期 姚 志建，生物化学和生物物理进展，4,54 1983 练鸿振，茅力.疏水作用色谱进展.色谱，1990，第八卷第三期