培训课件-免疫沉淀类试验——双扩免疫比浊.pptVIP

二、双向琼脂扩散试验 (一) 原理 将可溶性抗原和抗体置于琼脂凝胶板的对应孔中，两者各自在凝胶中向四周自由扩散，当抗原与抗体相遇，在比例合适时形成可见的白色沉淀线。沉淀线的特征与抗原抗体的浓度、纯度和扩散速率等有关。 (二) 操作步骤（平板法） 融化琼脂，浇板 每张载玻片约4ml。 凝固，打孔 孔径3mm，孔间距3~5mm，孔型有双孔型、三角孔型、双排孔型和梅花孔型。 加样 在相对孔内加抗原或抗体。 孵育 使抗原抗体自由扩散，在两孔之间抗原抗体相遇，在比例适时形成可见的沉淀线。沉淀线的数目、形态和位置与抗原和抗体的纯度、浓度和扩散速度有关。 (三) 双向免疫扩散试验的应用 1. 检测未知抗原或抗体及其相对含量 将已知的抗体或抗原与待检标本加入成对孔中，见图 : 根据沉淀线有无定性； 根据沉淀线的位置估计抗原或抗体的相对含量 根据沉淀弧形状判断抗原或抗体的相对扩散速率。 沉淀线形状、位置与抗原抗体扩散率及浓度的关系 A：Ag、Ab浓度及扩散率近似； B：Ag、Ab浓度近似，扩散率Ag＞ Ab ； C：Ag、Ab浓度近似，扩散率Ag＜ Ab ； D：扩散率近似，浓度Ag ＞ Ab ； E：浓度Ag ＞ Ab，扩散率Ag ＞ Ab ； F：浓度Ag ＜ Ab，扩散率Ag ＜ Ab 2. 抗原性质分析 利用三角孔型，将待检抗原和标准抗原加入相邻两个孔