人教-选修1-固定化酵母细胞及蔗糖酶的检测1汇总.pptVIP

固定化酵母细胞及蔗糖酶的检测 实验目的 了解酶与细胞固定化方法并掌握一种酵母细胞固定化技术。 了解蔗糖酶活力的测定原理及还原糖的定性检测法。 实验原理 固定化酶和固定化细胞是利用物理及化学的处理方法，将水溶性酶或细胞与固体的水不溶性支持物（或称载体）相结合，使其既不溶于水，又能保持酶和微生物的活性。它们在固相状态下增加了机械强度，稳定性提高，可回收反复使用，并在贮存较长时间后依然保持酶和微生物的活性不变。 常用的固定化方法有：（1）物理吸附法；（2）交联法；（3）包埋法。 相对于固定化酶，微生物细胞固定化技术的优点是可避免复杂的酶提取和纯化过程，也降低了成本，同时也解决了酶的不稳定性问题，操作稳定性也较好。 微生物细胞固定化常用的载体有：①多糖类（纤维素、琼脂、葡萄糖凝胶、海藻酸钙、K-角叉胶、DEAE-纤维素等）；②蛋白质（骨胶原、明胶等）；③无机载体（氧化铝、活性炭、陶瓷、磁铁、二氧化硅等）。 蔗糖酶活力的检测原理是利用了蔗糖酶可以催化蔗糖水解生成果糖和葡萄糖，而单糖含有游离羰基，具有弱还原性。某些弱氧化剂（如硫酸铜的碱性溶液，即斐林试剂）与单糖在煮沸的条件下，会有溶液的显色变化过程：浅蓝色→棕色→砖红色（氧化亚沉淀，）而蔗糖不能与斐林试剂发生颜色反应。且葡萄糖溶液浓度越高，颜色越深。 仪器和试剂 仪器：试管、2mL吸管2支、水浴锅、漏斗 试剂： 海藻酸钠若干克； 卡氏酵