小鹅瘟病原学与血清学和检测方法的辩析.pptVIP

小鹅瘟病原学与血清学  检测方法的研究 周碧君 教 授 温贵兰 贵州大学动物科学学院 小鹅瘟是由小鹅瘟病毒, 即鹅细小病毒(Goose parvovirus, GPV)引起，主要侵害一月龄以内雏鹅的一种急性、高度接触性、败血性传染病，传染性强、病程短且死亡率高。 近几年， 本实验室在对外检验中发现，我省惠水、三都、修文、麻江等4个县养殖场的3～30日龄雏鹅流行一种疫病，发病率为65.2%，病死率高达80%～100%, 其流行病学、临床症状和剖检变化特点与国内外报道的小鹅瘟非常相似。 患病雏鹅表现精神萎靡；排灰白或淡黄绿色稀粪，并混有气泡或纤维状碎片；病鹅极度衰竭，死亡前不断摇头,大量无色液体从鼻腔，口腔中流出，最后抽搐死亡。剖解可见十二指肠呈弥漫性红色；小肠中下段，特别是近卵黄蒂和回盲部的肠段，比正常肠段体积大2～3倍，肠段质地坚实，腔内充满淡灰或淡黄色的栓子，外面包裹了一层由纤维素性渗出物和坏死物凝固而形成的假膜。 根据流行病学、临床症状、剖检病变及治疗结果分析，作出疑似小鹅瘟的假定性诊断。 本研究对小鹅瘟疑似病例进行病原学研究与血清学检测，采集患病雏鹅样本通过鹅胚分离病毒，对该病毒进行了鉴定并命名为小鹅瘟XW株。建立两种血清学方法检测感染鹅群的血清抗体或病毒抗原，采用多聚酶链反应（PCR）扩增病毒VP3基因片段，对小鹅瘟进行确定性诊断。 1 病毒的分离与鉴定 取患病雏鹅的肝、肠等按常规方法制备病料样本，取病料样本接种12日龄鹅胚尿囊腔，收集感染胚尿囊液，连续传6代,每代设不接种的正常鹅胚作对照。分别测定病料样本对鹅胚的致死率、死亡时间、尿囊液的血凝价并观察胚胎病变。 代 次 接种数 死亡数 死亡率(%) 胚胎病变 血凝性 F1 22 19 86.3（19/22 ） -- F2 16 12 75.0（12/16 ） 胚体出血 -- F3 56 56 100（56/56 ） 发育阻滞 -- F4 32 32 100（32/32） 肝脏土黄 -- F5 73 71 97.3（71/73 ） 心肌苍白 -- F6 86 82 95.3（82/86） -- 图2 琼脂扩散试验 1.2 雏鹅人工感染试验 取非免疫5日龄健康雏鹅18只，分两组隔离饲养。试验组14只，胸部皮下接种感染鹅胚尿囊液；对照组4只，按同一途径、剂量接种生理盐水。 图4 小鹅瘟病毒核酸 图5小鹅瘟病毒VP3特异片段PCR图谱 根据Genebank登录的GPV VP3的基因序列，在浙大余旭平教授的指导下设计合成一对引物：P1、P2分别对应GPV全基因序列的3698-3719和4211-4233位。 以 XW株的核酸样本为模板，P1、P2为引物扩增编码VP3的基因片段，产物经1%的琼脂糖凝胶电泳检测。结果，琼脂糖凝胶电泳图谱显示一条530bp的DNA条带，与预期设计的长度536bp基本相符。 将患病雏鹅病料样本接种非免疫鹅胚，连续传代，根据感染胚胎的特征性病变、尿囊液中病毒抗原的检测等试验，证实从患病雏鹅的病料样本中分离出一株小鹅瘟野生强毒XW株,其核酸分子量为5000bp。 * * 前言 结果患病雏鹅的病料样本能在鹅胚中传代增殖，引起鹅胚死亡和胚胎病变。多数感染胚死于72～120h之间，未接种的对照胚健康存活。 表 1 鹅胚死亡率列表 代 次 接种数 死亡数 死亡率(%) 胚胎病变 血凝性 F1 22 19 86.3（19/22 ）