病毒滴度的测定案例.pptVIP

病毒滴度的测定 小结 主要介绍空斑形成单位法、50%终点法、血凝试验和干扰滴定法测定病毒滴度的原理及其方法； 重点要掌握空斑形成单位法、50%终点法测定病毒滴度的原理及其滴度的计算； 熟悉：空斑形成单位法、50%终点法、血凝试验和干扰滴定法测定病毒滴度的具体方法； * 原理(重点)：适当稀释的病毒悬液与长成单层的宿主细胞混合，在细胞上覆以营养琼脂培养基等固体或半固体介质，由于琼脂的限制，病毒只能感染并破坏临近的细胞，造成细胞溶解而形成空斑，每个空斑由一个病毒颗粒造成，计算空斑数量再乘以稀释倍数即可得知原来的病毒感染单位的浓度。 空斑形成单位法测定病毒滴度 空斑形成单位（Plaque Forming Units, PFUs) 空斑显现原理(掌握)：空斑形成后，经中性红活细胞染色，活细胞显示红色，而空斑区细胞不着色，形成不染色区域。 空斑形成单位法测定病毒滴度 Procedures 适用条件(熟悉)：凡是能在细胞中产生细胞病变效应(CPE)的病毒都可以采用空斑形成法测定病毒滴度。 空斑形成单位法测定病毒滴度 中性红 (掌握) (熟悉) (了解) (了解) 空斑形成单位试验技术举例 p51-52 防止琼脂凝固； Hanks液？ 双抗？ 5% CO2 空斑形成单位的计算 (重点) (掌握) (熟悉) CCID50 ID50 LD50 (重点) (熟悉) 5% CO2培养箱 (熟