基因敲除三大技术对比.docVIP

基因敲除三大技术对比? 技术名称 优势 局限性 可提供服务类型 基于胚胎干细胞的同源重组技术 成熟、可靠、精细是目前为止唯一一个可以满足所有要求的打靶技术 1）需要ES细胞，目前只有小鼠有高效的ES细胞，其它模式动物的ESC还不能实现大规模应用。2）周期长、工作量大、费用相对比较高 1）全基因敲除模式小鼠?2）条件性基因敲除模式小鼠?3）先全敲除再条件性敲除模式小鼠?4）基因敲入模式小鼠?5）ROSA位点定点转基因 TALEN技术 基因敲除效率高，速度快，可实现多物种基因敲除 基因敲入效率较低，多基因敲除困难，系统构建相对复杂，存在脱靶风险 1）全基因敲除大/小鼠?2）全基因敲除细胞系 EGE系统 基因敲除/敲入效率高，速度快，可实现多基因、多物种基因敲除/敲入，系统构建简单 存在脱靶风险，但通过选择合适的sgRNA可以有效降低脱靶率，In vivo脱靶可通过传代去除 1）全基因/条件性基因敲除大/小鼠?2）全基因/条件性报告基因敲除/敲入大/小鼠3）CRISPR/Cas9粒构建?4）细胞系敲除/敲入 免疫类 B-NSG小鼠：Biocytogen-NOD-SCID-IL2rg?B-NSG小鼠是NOD遗传背景，Prkdc和IL2rg双基因敲除的小鼠，是目前国际公认的免疫缺陷程度最高、最适合人源细胞或组织移植的工具小鼠。?基本特征??NOD（non-obese diabetes）遗传背景：自发I型糖尿病；其巨噬细胞对人源细胞吞噬作用弱；先天免疫系统，如补体系统和树突状细胞功能降低。??Prkdcscid ：Prkdc（protein kinase DNA-activated catalytic）基因突变，小鼠的功能性T和B细胞缺失 ，淋巴细胞减少，表现为细胞免疫和体液免疫的重度联合免疫缺陷（severe combined immune deficiency, scid）。?Il2rgnull： Interleukin-2受体的gamma链（IL-2R γc，又称CD132）位于小鼠X染色体上，是具有重要免疫功能的细胞因子Il2、Il-4、Il-7、Il-9、Il-15和I-21的共同受体亚基，该基因敲除后的小鼠机体免疫功能严重降低，尤其是NK细胞的活性几乎丧失。B-NSG小鼠：综合了NOD-SCID-IL2rg背景特征，具有重度免疫缺陷表型，无成熟T细胞、B细胞和功能性NK细胞，细胞因子信号传递能力缺失等。非常适合人造血干细胞及外周血单核细胞的移植和生长。?优点??迄今世界上免疫缺陷程度最高的工具小鼠；?与NOD-scid小鼠相比寿命更长，平均长达1.5年；?对人源细胞和组织几乎没有排斥反应；?少量细胞即可成瘤，依赖于细胞系或细胞类型；?无B淋巴细胞泄漏。成功案例小鼠脾脏流式分析图 ： 主要应用领域??人源细胞或组织移植??肿瘤和肿瘤干细胞研究?ES和iPS细胞研究?造血和免疫学研究?人类疾病感染模型研究 IL17-EGFP knockin mice?Catalog number:BCG‐IM-0001?Name：C57BL/6-Il17atm1BcgenMouse strain：IL17‐EGFP knockin miceGene common name ：Interleukin 17A, IL‐17A,IL17AChromosome ：Chromosome 1Allele Type ：Targeted (Knockin)Strain of Origin：C57BL/6JES Cell Line Strain：C57BL/6Expressed Gene：EGFP, Enhanced Fluorescent ProteinNote：DNA fragment containing IRES‐EGFP‐SV40polyA signal sequence was inserted downstream of the stop codon of theinterleukin 17A (IL17A) gene. 疾病模型类