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免疫磁性微球技术专题 技术简介： 免疫磁性微球（Immunomagnetic Microspheres，IMMS），或称免疫磁珠（Immunomagnetic Beads，IMB）是免疫学和超顺磁性磁珠结合而发展起来的一类新型材料。免疫磁珠是包被有抗体或具有抗体结合功能的超顺磁性微球，当它与含有靶物质的样品混合孵育时，可与靶物质特异性地结合而形成具有磁响应性的复合物，此复合物可被磁场滞留，从而与样品中其他杂质分离。免疫磁性分离简便易行，分离纯度高，保留靶物质活性，且高效、快速、低毒，可广泛应用于细胞分离和提纯、免疫检测、免疫纯化、免疫沉淀等领域。 核心原理： 磁性材料在高温条件下，或是磁性颗粒的粒度很小时，其磁性很容易随周围的磁场改变而改变，磁体的极性也呈现出随意性，难以保持稳定的磁性能，这种现象就是超顺磁效应。超顺磁性磁珠能在外部磁场的作用下迅速聚集，当磁场撤离后即可重新分散而不带有剩磁，这种特性使其作为一种新型的分离纯化基质被广泛用于生物活性物质的分离纯化技术上。理想的磁珠具有均匀的球形、由具有超顺磁性的铁质核心及高分子保护外壳，大小从50~10000nm不等。表面常带有化学功能的基团，如-OH、-NH2、 -COOH和-CONO2等，使得磁珠几乎可以偶联任何具有生物活性的蛋白。磁珠与多数生物高分子如多聚糖、蛋白质等具有良好的生物相容性。在生物工程，特别是在生物医学领域应用，具有良好的生物相容性是非常重要的。 免疫磁珠用于细胞分离和提纯 ： 在临床医学和基础医学研究领域，经常需要对各种需要的特定种类的细胞进行分离，流式细胞分选技术是一种目前使用较多的细胞分选方法，其原理是用荧光标记抗体的细胞受光激发后在电场中运动方向会发生改变，藉此来将抗体阴性细胞分开，但该方法存在费用高、分离时间长，细胞处理量小等缺陷。 应用免疫磁珠分离细胞是细胞分选的一大突破，该方法方便、快速、分离细胞的纯度高，具有较好的生物活性。使用免疫磁珠进行分离细胞有两种方式；直接从细胞混合液中分离出靶细胞的方法，称为阳性分离；用免疫磁珠去除无关细胞，使靶细胞得以纯化的方法称为阴性分离。免疫磁珠技术可用来分离人类各种细胞如红细胞、外周血嗜酸/碱性粒细胞，神经干细胞、造血细胞、T淋巴细胞、人类关节滑膜细胞、树突状细胞、内皮细胞、及多种肿瘤细胞等。 免疫磁珠用于免疫检测 ： 免疫磁珠的超顺磁性使固/液相分离更加简便，可省去过滤等繁杂的传统操作，磁珠微小，比表面积大，与生物分子等物质偶联时容量大，悬浮稳定性好，有利于抗原抗体反应顺利进行，因此，免疫磁珠在医学及生物学检测、环境监测及食品安全检测等领域有着很好的应用前景。 在免疫检测中，免疫磁珠替代传统酶标板作为固相载体，包被在磁珠表面的抗体（或抗原）可与环境中特异性抗原（或抗体）结合，形成抗原-抗体复合物，在外加磁场作用下，使特异性抗原（或抗体）与其它物质分离，这种分离方法使整个反应在液相中进行，克服了放射免疫测定和传统酶联免疫测定方法中抗原抗体反应发生在固/液相之间等的缺点，具有灵敏度高、检测速度快、特异性高、重复性好等优点，因而磁性粒子可广泛应用于生物医学检测，如检测体内各种抗原或抗体，癌细胞、环境、生物样品及食品中的微生物。更重要的是，该方法能够将待检测物质分离出来，可用于微生物的富集培养及细胞（如癌细胞，巨核细胞及T细胞等）分选等的研究。 免疫磁珠还可与化学发光、荧光免疫等技术相结合，从而极大地提高检测灵敏度，对于极微量物质的检出及定量测定等都是一项具有很好应用前景的检测方法。 免疫磁珠用于单抗免疫纯化： 单克隆抗体是B淋巴细胞和骨髓瘤细胞杂交形成的杂交瘤细胞产生的，其重链和轻链所形成的结构域可以识别和结合特异抗原。至2007 年，FDA 已批准了20 多种治疗性单克隆抗体药物，约一半用于治疗癌症，多个已成为年销售额超十亿美元的“重磅炸弹”药物。全球单克隆抗体药物的市场增长十分迅猛，有约200 多种单抗在临床实验，占整个临床生物技术药品总数的三分之一多，其中四分之一在临床三期或等候批准。 单抗药物的迅猛发展对抗体纯化工业提出了新的挑战。目前，主流的抗体纯化生产主要包括以下步骤：1、 发酵液澄清； 2 、抗体捕获；3 、抗体精细纯化；4 、抗体浓缩洗滤；5 、抗体过滤除菌/制剂。在抗体捕获阶段，主要应用蛋白A亲和层析技术从发酵上清液中提取抗体。蛋白A是一种从金黄葡萄球菌细胞膜上提取的蛋白，具有5个IgG结合结构域，能特异性地与抗体Fc端结合。传统的层析技术存在其固有的缺点，包括：发酵溶液需进行澄清操作；层析操作耗时长，仪器昂贵；配体脱落等问题。 应用蛋白A包被的免疫磁珠纯化技术无需复杂的层析设备，对样品的澄清度没有限制，只需要简单的磁性吸附步骤即可很方便快捷地从单抗表达产物中分离单抗，有效解