第三章+非细胞型生物.ppt

●双层平板法 技术要点： 1.双层琼脂 , 2.半固体琼脂 3.高浓度宿主细胞, 4.倒上皿温度 ●双层平板法测定效价的优点 1）弥补平板不平 2）噬菌斑位于同个平面，较清晰 3）上层为半固体培养基，有利噬菌体 扩散 ●一步生长曲线（Debruck，1939） 定量描述烈性噬菌体生长规律的 实验曲线，用于反映各种噬菌体潜伏 期、裂解期和裂解量的特征曲线。 1、用噬菌体的稀释液感染高浓度的宿主细胞； 2、数分钟后，加入抗噬菌体的抗血清（中和未吸附的噬菌体）； 3、将上述混合物用培养物大量稀释，终止抗血清的作用和防止新释放的噬菌体感染其它细胞； 4、保温培养并定期检测培养物中的噬菌体效价（对噬菌体含量进行计数）； 5、以感染时间为横坐标，病毒的感染效价为纵坐标，绘 制出病毒特征性的繁殖曲线； ●实验步骤 问题：1）在一个培养系统中，如何测定噬菌体数量？ 2）请设想不断的定时测定，群体数量的变化过程？ ●裂解期： ●平稳期： 效价最高期 ●裂解量： 每个受染细胞产生的噬菌体的总数。 （平稳期pfu/ 受染细胞？） ●潜伏期： 侵入到装配 : 隐悔期；胞内累积期 ●温和噬菌体 溶原性（溶原现象）:温和噬菌体侵入宿主后并不引起宿主细胞裂解的现象称之。 溶原菌：受温和噬菌体感染的宿主称之为溶原菌。 前噬菌体：整合在宿主基因组上的温和噬菌体的核酸。 ●溶源原因 ----合成阻遏蛋白，阻遏噬菌体mRNA合成 -----关闭某些噬菌体蛋白基因 晚期蛋白） 的表达 ----整合酶的合成 ● λ噬菌体整合过程 ●温和噬菌体的自发或诱发裂解 UV、X射线和氮芥子气能干扰或 破坏阻遏蛋白的作用，从而使噬菌 体失去溶源控制，进入裂解过程。 ●λ噬菌体感染结果 ●温和噬菌体存在状态 ---- 游离态 ----整合态 ----营养态 ●温和噬菌体的检查 二 植物病毒和动物病毒 ●植物病毒的特点 ----病毒粒子形态螺旋对称 ----通过昆虫、伤口等传播途径进入宿主细胞 ----核酸主要为SSRNA ----引起花叶、黄化、从枝、枯斑等症状 ●植物病毒形态 +SSRNA： RNA的碱基序列与病毒的mRNA序列相同，可以直接用于指导蛋白质的合成。 （但逆转录病毒则需逆转录为DNA才能合成蛋白质。） -SSRNA： RNA的碱基序列与病毒的mRNA序列互补，需要合成+mRNA，才能合成相应的蛋白质。 ●植物病毒的装配 ●动物病毒与人类疾病 ●核酸类型 ●动物病毒的增殖 （吸附）→侵入→脱壳→增殖→释放 * * chap 3 病毒和亚病毒 §1 病毒（Virus） §2 亚病毒 subvirus ●病毒发现的历史 Ivnowsky 1892 : TMV Beijerinck 1898 ： ‘ filterable virus’ Loeffler（1898）口蹄疫病毒 Towort（1915）噬菌体 非细胞生物： ----真病毒 ----亚病毒： 类病毒、拟病毒、朊病毒 §1 . 病毒（真病毒） ●病毒 病毒是一类核酸和蛋白质等少数几 种成分组成的超显微非细胞生物，本 质是一种只含DNA或RNA的遗传因子， 能以感染态和非感染态两种状态存在。 病毒的分类： ●寄主： 动物病毒、植物病毒、噬菌体 ●遗传物质： DNA病毒、RNA病毒、 ●形态： 杆状 螺旋状）、多面体、复合型 ●病毒的特征 1.形态极其微小 2.无细胞构造的分子生物 3.只含一种核酸 4.高度的寄生性 5.通过装配方式进行繁殖 6.离体可保持长期的侵染活性 7.对抗生素通常不敏感 8.有些能够整合到寄主的基因组中 ●病毒与人类： 1）病毒对人类健康的危害 2）对人类生活的影响 2）病毒作为分子生物学研究的工具： ----DNA是遗传物质的证明 （噬菌体感染实验） ----遗传物质转移的载体 ----蛋白质工程（噬菌体展示技术 建议读物： H5N1型禽流感病毒（蓝色）正攻击红色细胞 疯牛病 HIV 病毒的计量 单位： nm 病毒的基因组： Qβ：3个基因 一、形态构造与化学成分 （一、大小） （二）病毒粒子结构与组成 壳粒：构成病毒外壳的形态亚单位。 病毒 粒子 核心：由DNA或RNA构成 核衣壳 （基本 构造 ） 衣壳：由许多衣壳粒蛋白构成 包膜 （非基本构造）：由类脂和糖蛋白构成,有的带有刺突 流感病毒刺突 血凝素蛋白：与宿主唾液酸结合 神经氨醇酶：帮助病毒进入宿主 ●病毒的群体形态 1、包涵体（病毒）： 昆虫病毒在宿主细胞内聚集而成的晶体结构。 2、噬菌斑 3、空斑 4、枯斑（组织坏死） 蚀（噬）斑测定（plaque assay）： （病毒感染性作