SDS-PAGE和Western_blotting实验设计.docVIP

SDS和Western blotting法测脊髓细胞内Caspase-3 【前言】 1.关于SDS（十二烷基磺酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳）： ⑴发展历程：SDS技术，SDS（十二烷基磺酸钠），以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术最初由hapiro于1967年建立。1969年由Weber和Osborn进一步完善。SDS是一种阴离子剂SDS能断裂分子内和分子间氢键，破坏蛋白质的二级和三级结构，强还原剂能使半胱氨酸之间的二硫键断裂，蛋白质在一定浓度的含有强还原剂的SDS溶液中，与SDS分子按比例结合，形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物（一种形似“雪茄烟”的长椭圆棒，其短轴长度相等），这种复合物由于结合大量的SDS，使蛋白质丧失了原有的电荷状态形成仅保持原有分子大小为特征的负离子团块，从而降低或消除了各种蛋白质分子之间天然的电荷差异和结构差异，由于SDS与蛋白质的结合是和蛋白的分子量成比例的，因此在进行电泳时，蛋白质分子的迁移速度取决于分子量大小。聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺 简称Acr 和交联剂N，N’—亚甲基双丙烯酰胺（简称Bis）在催化剂’,N’-四甲基乙二胺（TEMED）作用下，聚合交联而成的具有网状立体结构的凝胶。SDS以此为支持物进行电泳一般采用的是不连续缓冲系统不连续体系由电极缓冲液、浓缩胶及分离胶所组成。2种孔径的凝胶、2种缓冲体系、3种pH值形成了凝胶孔径、