RACE技术资料.docVIP

目录 1 主要分类 2 发展历史 3 引物设计 4 比较与优化 5 实验步骤 6 PCR扩增 7 产物验证 8 克隆和测序 9 cDNA的获得 展开 1 主要分类 2 发展历史 3 引物设计 4 比较与优化 5 实验步骤 6 PCR扩增 7 产物验证 8 克隆和测序 9 cDNA的获得 1 主要分类编辑本段 　　 　　一般分5-和3-RACE两种。 　　3-RACE较简单，首先将mRNA或总RNA用PolyT引物反转录，根据一般基因具有polyA尾巴的特点，选用特异引物(根据已知序列设计)和PolyT引物PCR即可。大多实验者反映一次PCR可以搞定。 　　5-RACE相对较难，目前流行几种5-RACE。其一为加接头(传统)，根据接头引物和自己设计特异引物PCR，可以设计巢式PCR二次扩增。另外，有利用反向PCR技术，连接成环在PCR。还有，GENE公司一种smartRACEPCR，利用反转酶末断加C特点,直接加上多G接头，转换模板而无需用连接酶加接头。 2 发展历史编辑本段 　　 　　经典的RACE技术是由Frohman等(1988)发明的一项技术，主要通过RT-PCR技术由已知部分cDNA序列来得到完整的cDNA5’和3’端，包括单边PCR和锚定PCR。该技术提出以来经过不断发展和完善，克服了早期技术步骤多、时间长、特异性差的缺点(Frohman等，1995：Schae