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附件6 中药学院综合设计性实验方案 实验课程名称： 对阿托品半数致死量的测定 实验分组号： 填写日期： 实验名称 一、项目背景（实验的目的、意义，以及欲解决的问题和国内外研究现状） 实验的目的：通过对阿托品半数致死量进行测定，希望为临床安全有效使用阿托品提供参考。 实验的意义：半数致死量(LD50)是某一药物使实验动物总体死亡一半的剂量，衡量一个药物急性毒性的大小，一般是以该药物使动物致死的剂量(Lethal Dose)为指标，通常求其LD50，因为动物的生死较其他反应容易判断，LD50又是剂量反应曲线上最敏感的一点，容易测得，准确性高，误差小，易重复[1]。 半数致死量（LD50）是评价化学物质急性毒性大小最重要的参数，也是对不同化学物质进行急性毒性分级的基础标准。化学物质的急性毒性越大，其LD50的数值越小。LD50 越大越好， 就是说浓度要很高很高才会导致半数死亡。 常与最大效应浓度ED50）配合计算治疗指数LD/ED50，用以评价药物的安全性，治疗指数大的药物相对安全。 (2)评价药物安全性 (3)申报新药过程中必须具备的药效学资料 (4）计算治疗指数，半数致死量和半数有效量的比值称为治疗指数。治疗指数是评价药物安全度常用的指标，起数值越大，表示该药物应用越安全。 (5）观察毒性症状，为积蓄性毒性和长期毒性试验的剂量选择提供参考。 阿托品为抗M胆碱药，具有松弛内脏平滑肌，解除平滑肌痉挛的作用，其与平滑肌的功能状态有关。治疗量时对正常活动的平滑肌的影响较小，但对过度活动或痉挛的内脏平滑肌则有显著的解痉作用，可缓解或消除胃肠平滑肌的绞痛，对膀胱逼尿肌、胆管、输尿管支气管都有解痉作用，但对子宫平滑肌影响较小虽然可透过胎盘屏障但对胎儿先天无明显影响，也不抑制新生儿呼吸。本药大剂量可医治胃酸分泌，但对胃酸的浓度，胃蛋白酶和黏液的分泌影响很小。随剂量增加可依次出现以下反应：腺体分泌减少，瞳孔扩大和调节麻痹，心率加快，膀胱和胃肠道平滑肌的兴奋性降低，胃液分泌抑制，中毒剂量则出现中枢症状[2]。 欲解决的问题：在预实验中先找出100％与0％的致死剂量为实验的上下限剂量（Dmax和Dmin）。按照比例设计出具有一定梯度的药物浓度。 国内、外研究现状： 半数致死量的测定方法大致可分为一下几种。 一、改进寇氏法 改进寇氏法是利用剂量对数与死亡率呈s型曲线而设计的方法，又称Karber发或平均致死量法。本法要求每个染毒剂量组动物数要相同，各组剂量组组距呈等比级数，死亡率呈正态分布，最低剂量组死亡率呈20%，最高剂量组死亡率80%。 1．预实验得到使动物全部死亡的最小剂量和使动物一个也不死的最大剂量。 2．确定组距、组数和各组剂量。 3．得出实验结果的死亡率 4．根据公式得出lgLD50 特点：动物的死亡率要呈正态分布，具有一定的局限性。 二、序贯法 1．预实验得到使动物全部死亡的最小剂量和使动物一个也不死的最大剂量。 2．确定组距、组数和各组剂量。 3．从最大剂量开始实验，给药后，10min内死亡则用“+”表示，下一组用低一级剂量，10min内不死则用“-”表示，下一组用高一级剂量。 4．计算X·R、∑（X·R） 5．按公式计算普萘洛尔的半数致死量 LD50＝lg-1（C/n）(mg/kg) 特点：用动物少是此法最大优点，但它只适用于那些作用出现快的药物，不能计算参数[3]。 三、bliss法[4] 1．将实验所得的反应率由百分率与概率单位转换表查出概率单位称经验概率单位（yem） 2．在坐标纸上, 根据对数剂量与yem构成点, 用目测法绘制一条直线, 绘制时应适当照顾靠近概率单位等于5的点, 并由直线找出各对数剂量（包括产生P=0或P=1的对数剂量）相当的概率单位称期望概率单位称期望概率单位（Y），见图 3．通过公式计算出作业概率单位（y），以便对Y进行校正，计算公式如下： y=（Y-P/Z）+P/Z(1-1) y=（Y+Q/Z）-Q/Z(1-2) 式中y极小值（Y-P/Z）为所有动物都生存时的概率单位，y极大值（Y+Q/Z）为所有动物都死亡时的概率单位，全距（1/Z）为极大值与极小值间的距离，P为实验所得的死亡率，q=1-p为存活率，公式(1-1) (1-2)计算结果相同，可任意选用。Y-P/Z、1/Z、Y+Q/Z、W均由作业概率单位的极大值、极小值、全距与权重系数表查出。 4．将各点加权（nw），用x2作直线性测验，如各点不显著偏离直线，即可计算回归直线方程。如果由直线方程得到的期望概率单位（Y1）与前次的不够接近，则对Y1再次校正。 （1）由公式计算x与y的离均差平方和、离均差积和： Sxx=