LCMSMS-60 蜂蜜中四环素.docxVIP

作者：钟启升 广州分析中心 Email: skczqs@ SSL-CA09-553岛 SSL-CA09-553 岛津应用数据集 ●色谱分析 LCMSMS-060 超高效液相色谱三重四极杆质谱联用法测定蜂蜜中5种四环素类抗生素的残留 摘 要：本文建立了一种使用岛津超高效液相色谱仪和三重四极杆质谱仪联用测定蜂蜜中5种四环素类抗生素残留的方法。蜂蜜样品中的四环素类抗生素经固相萃取富集后，使用超高效液相色谱LC-30A快速分离，三重四极杆质谱仪LCMS-8040进行定量分析。使用外标法绘制5种四环素类抗生素的校准曲线，线性范围宽，校准曲线的相关系数均在0.9996以上。对5 μg/L、10 μg/L和50 μg/L混合标准溶液进行精密度实验，连续6次进样保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在0.20% ~1.14%和0.62% ~ 3.79%之间，系统精密度良好。其检出限为31.9~63.4 ng/L，定量限为127~254 ng/L，样品加标回收率在86.9 ~ 98.1%之间。 关键词：四环素 抗生素 三重四极杆质谱 蜂蜜 四环素类抗生素(Tetracyclines, TCs)是临床上广泛应用的广谱抗生素。然而，不合理地使用该类药物，如用药剂量过大、用药时间过长、滥用药物及不遵守休药期提前屠宰等，导致该类药物及其代谢产物残留于动物的肌肉、蛋、奶、脏器组织及分泌物中。四环素类抗生素并不能被动物完全吸收，有相当部分以原形或代谢物形式进入食物链和环境中，间接对人体健康造成影响。 近年来，蜂蜜产业发展迅速。我国蜜蜂大多是从国外引进的，发病率比较高，虽然国家提倡生物防治，但还是有一部分人用化学药物、抗生素来给蜜蜂治病，导致蜂蜜中抗生素含量较高。因此，迫切需要建立高效灵敏的蜂蜜中四环素的检测方法。 高效液相色谱-串联质谱联用技术是近些年来发展很快的分析技术，具有高的选择性和灵敏度，对复杂基体中的药物残留具有准确的定性能力。本文建立了一种使用岛津超高效液相色谱仪LC-30A和三重四极杆质谱仪LCMS-8040联用测定蜂蜜中的五种四环素类抗生素的方法。 1. 实验部分 1.1仪器 本实验使用岛津超高效液相色谱仪LC-30A与三重四极杆质谱仪LCMS-8040联用系统。具体配置为LC-30AD×2输液泵，DGU-20A5在线脱气机，SIL-30AC自动进样器，CTO-30AC柱温箱，CBM-20A系统控制器，LCMS-8040三重四极杆质谱仪，LabSolutions Ver. 5.53色谱工作站。 1.2分析条件 液相条件 色谱柱：Shim-pack XR-ODS II, 2.0 mm I.D.× 100 mm L., 2.2 μm粒径。 流动相：A－0.1%甲酸的水溶液； B－甲醇 流速：0.25 mL/min 柱温：室温。 进样量：20 μL 洗脱方式：梯度洗脱，B相初始浓度为20%，洗脱程序见表1。 表1 梯度洗脱程序 Time(min) Module Command Value 5.00 Pumps Pump B Conc. 95 6.00 Pumps Pump B Conc. 95 6.01 Pumps Pump B Conc. 20 8.00 Controller Stop 　 质谱条件 离子化模式： ESI(+) 离子喷雾电压：4.5 kV 雾化气： 氮气 3.0 L/min 干燥气： 氮气 15 L/min 碰撞气： 氩气 DL温度： 250℃ 加热模块温度：400℃ 扫描模式： 多反应监测(MRM) 驻留时间： 10 ms 延迟时间： 3 ms MRM参数：见表2 1.3样品制备 标准溶液配制：称取适量五种标准物质，分别为四环素、土霉素、去甲基金霉素、金霉素和强力霉素，用甲醇配制1000 mg/L的混合标准储备溶液溶液，用甲醇+0.1甲酸水溶液(V/V, 1:4)稀释成不同浓度的混合标准工作液。 样品前处理方法：蜂蜜样品的制备、净化、提取参照《GB/T 23409-2009 蜂王浆中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法》。 表2 MRM优化参数 化合物名称 英文名 CAS. NO 前体离子 产物离子 Q1 Pre Bais(V) CE(V) Q3 Pre Bais(V) 四环素 HYPERLINK javascript:showMsgDetail(ProductSynonyms.aspx?CBNumber=CB6153810postData3=CNSYMBOL_Type=A); Tetracycline 60-54-8 445.20 410.10* -22 -20 -29 427.15 -22 -14 -30 土霉素