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高效液相色谱对芥子油苷的提取和分离
I 准备阶段：
1. 水浴锅设置80℃
2.配制两瓶70%的甲醇，其中一瓶置于水浴锅中温浴。
3.5mM苄基芥子油苷.2.33mg/ml
4.0.5M醋酸盐（PH=5）[30mlHAC，960ml H2O，加10-20g NaOH粉末，调至PH=5]
5.20mM的醋酸盐，PH=5：将4中的稀释25倍
6.DEAE sephadex A-25：称取3g 树脂，加90ml 0.5M 醋酸盐（PH=5）室温过夜溶解。
7.硫酸酯酶：15mg溶解于6ml 20mM 醋酸钠中，PH=5（16100uM/hour/g）
II 芥子油提取
1. 取新鲜莲座叶，鲜重5-10mg
2. 放入1.5mlEP管中，迅速放入液氮。
3. 研磨成粉末后并加入1ml 预热的70%的甲醇。
4. 加入50ul 5mM 的苄基芥子油苷
5. 盖好盖子漩涡震荡置于冰上，剩下的样品重复步骤3-4。
6. 所有的样品置于80℃10min。
7. 4000rpm，10min。
8. 将上清液转移至1.5 的离心管。
9. 用预热的甲醇重新提取两次，收集所有的上清液至4ml，-20℃保存。
III 芥子油苷的脱硫纯化
1. 搅拌DEAE sephadex A-25 树脂成溶液，用1ml的移液器取1ml加入BioRad 管中，让其沉淀。
2. 用5ml 的灭菌水清洗（禁止干燥）。
3. 加入所有的芥子油苷提取液。
4. 用2ml的70%的甲醇清洗两次，2ml 的灭菌水清洗5次，2ml 20mM 醋酸盐PH=5清洗一次。
5. 加入0.5ml 硫酸酯酶，直至上侧的橡胶管中剩余1-2mm的液相。
IV 脱硫芥子油苷的洗脱
1. 用1ml 灭菌水洗脱3次。
2. 浓缩至EP 管中剩余0.5ml 液体
V HPLC分离脱硫芥子油苷
1. 取60ul 洗脱液于HPLC管中，吸入30ul
2. 检测：PDA 190nm-370nm （或者DV229nm和260nm）
3. 流速：1ml/min
4. 运行梯度：灭菌水（A）和甲醇（B），60min
A100%,B0% 2min
A to 60%B线性 48min，60%B to 100% B 线性 3min
A 0%，B100% 3min
B to 100% A 线性 4min
VI 芥子油苷的HPLC-MS
5. 取60ul 洗脱液加入HPLC管中，吸入6ul
6. 检测：质谱，[M+Na+]
7. 流速：0.25ml/min
8. 运行梯度：混有50uM的醋酸钠灭菌水（A）与甲醇（B），60min
A100%,B0% 2min
A to 60%B线性 40min，60%B to 100% B 线性 5min
A 0%，B100% 5min
B to 100% A 线性 8min
”:4OHIM，IM,1IM和4IM.
拟南芥中芥子油苷：
拟南芥：
大白菜：
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