细菌形态理化鉴定解析.doc

细菌形态理化鉴定 1形态学特征 2 2生理生化特性实验 2 1、尿素酶（Urease）试验 2 2、氧化酶（Oxidase）试验 3 3、过氧化氢酶的测定 3 4、甲基红（Methyl Red）试验 4 5、V-P试验 4 6、含碳/氮化合物的利用 4 7、葡萄糖的氧化发酵试验（O-F实验） 5 8、糖或醇类发酵试验 6 9、硝酸盐（Nitrate）还原试验 7 10、靛基质（Imdole）试验（吲哚试验） 7 11、三糖铁（TSI）琼脂试验 8 12、氨基酸脱羧酶的测定 8 13、硫化氢（H2S）试验 8 14、柠檬酸盐或丙酸盐的利用 9 15、利用丙二酸盐试验 9 16、葡萄糖酸盐的氧化 9 18、β-半乳糖苷酶（ONPG）的测定 10 19、耐盐性试验 10 20、卵磷脂酶的测定 10 21、石蕊牛奶的反应 11 22、酪素水解试验（酪蛋白水解） 11 23、酪氨酸水解 12 24、苯丙氨酸脱氨试验 12 25、产糊精结晶试验 12 26、从甘油产生二羟基丙酮 12 27、厌氧硝酸盐产气 12 28、马尿酸盐水解试验 13 29、对叠氮化钠的抗性 13 30、氰化钾试验 13 31、对溶菌酶抗性的测定 13 32、在pH5.7营养肉汤上的生长 13 33、需氧性试样 14 34、明胶（Gelatin）液化试验 14 35、淀粉水解试验 14 36、生长温度的测定 15 37、形成芽孢的培养基 15 38、O/129的敏感性试验 15 1形态学特征 1.1菌落形态 培养到24h后观察平板上单菌落形状、大小、颜色与突起特征。 1.2细胞形态 光学显微镜观察菌体的形态、大小、运动性等。 1.3革兰氏染色 取无油迹的干净载玻片，滴上一滴无菌蒸馏水，用接种环挑取少许菌苔，于水滴边缘轻轻涂几下。自然风干，在火焰上通过几次，固定涂片。滴加结晶紫液，染1min，用水冲净结晶紫液。滴加碘液冲净残水，并覆盖约lmin。用水冲去碘液，将片上的水甩干。滴加95%乙醇液脱色约20-30s，并立即用水冲净乙醇。用番红液染l-2min。用水洗净番红，风干，用显微镜油镜观察涂片。 1.4芽孢染色 取培养24h左右的菌体涂片、干燥、固定。滴加3-5滴孔雀绿染液于已固定的涂片上。用木夹夹住载玻片在火焰上加热，使染液冒蒸汽但勿使沸腾，切忌使染液蒸干，必要时可添加少许染液。加热时间从冒蒸汽时开始计时约4-5min。倾去染液，待载玻片冷却后水洗至孔雀绿不再褪色为止。用蕃红水溶液复染lmin，水洗。待干燥后，置油镜观察，芽孢呈绿色，菌体呈红色。 1.5荚膜染色 按常规取菌涂片，空气中自然干燥。用1%的结晶紫水溶液染色2min。以20%的硫酸铜水溶液冲洗，用吸水纸吸干残液。干后用油镜观察。菌体染成深紫色，菌体周围的荚膜呈淡紫色。 2生理生化特性实验 1、尿素酶（Urease）试验 有些细菌能产生尿素酶，将尿素分解、产生2个分子的氨，使培养基变为碱性，酚红呈粉红色。尿素酶不是诱导酶，因为不论底物尿素是否存在，细菌均能合成此酶。其活性最适pH为7.0。 试验方法：挑取18~24h待试菌培养物大量接种于液体培养基管中，摇均，于36±1℃培养10，60和120min，分别观察结果。或涂布并穿刺接种于琼脂斜面，不要到达底部，留底部作变色对照。培养2，4和24h分别观察结果，如阴性应继续培养至4天，作最终判定，变为粉红色为阳性。 培养基配制方法：蛋白胨：1 g ；NaCl：5 g ；KH2PO4 ：2 g ；葡萄糖 1 g ；琼脂：15 g；酚红：0.012g；蒸馏水 1000 ml。除酚红外，溶解上述成分，并调节PH为6.8～6.9，然后加入酚红指示剂，使培养基呈橙黄色，分装，115灭菌20min。待培养基冷至50左右，加入预先过滤除菌的20%尿素水溶液，使其终浓度为2%。试验方法：挑取18~24h待试菌培养物大量穿刺接种于琼脂斜面，不要到达底部，培养1～4d观察结果，如为阴性应继续培养一下，作最终判定，变为粉红色为阳性。 Oxidase）试验 　　氧化酶亦即细胞色素氧化酶，为细胞色素呼吸酶系统的终末呼吸酶，氧化酶先使细胞色素C氧化，然后此氧化型细胞色素C再使对苯二胺氧化，产生颜色反应。 试验方法：在琼脂斜面培养物上或血琼脂平板菌落上滴加试剂1~2滴，阳性者Kovacs氏试剂呈粉红色~深紫色，Ewing氏改进试剂呈蓝色。阴性者无颜色改变。应在数分钟内判定试验结果。 注意事项： 盐酸二甲基对苯撑二胺溶液容易氧化，溶液应装在棕色瓶中，并在冰箱内保存，如溶液变为红褐色，即不宜使用。 铁、镍铬丝等金属可催化二甲基对苯撑二胺呈红色反应，若用它来挑取菌苔，会出现假阳性，故必须用白金丝或玻璃棒（或牙签）来挑取菌苔。 在滤纸上滴加试剂，以刚刚打湿滤纸为宜，如滤纸过湿，会防碍空气