ITP腹腔镜术前后T淋巴细胞亚群变化与疗效分析.docVIP

ITP腹腔镜术前后T淋巴细胞亚群变化与疗效分析 [摘要] 目的：研究分析特发性免疫性血小板减少性紫癜（Immune thrombocytopenic purpura,ITP）患者腹腔镜前后外周血中血小板相关抗体及T淋巴细胞亚群的变化情况，并探讨其与手术疗效的相关性及临床意义。方法：抽取2013年5月至2014年5月我院ITP行腹腔镜术的患者87例作为研究对象，按照手术前后分别予所有患者以治疗前组与治疗后组命名。另抽取30例健康志愿者作为对照组。检测分析各组的血小板相关抗体及T淋巴细胞亚群的变化情况。结果：治疗前组的PAIgA、PAIgG、PAIgM水平显著高于治疗后组与对照组，治疗前组CD3+、CDD3+CD4+、CD3+CD4+/CD3+CD8+、CD16+56+的百分比则均低于治疗后组及对照组，而治疗前组CD3+CD8+、CD19+百分比其余两组。治疗后组与对照组的相关抗体水平、各项淋巴细胞亚群百分比相比，均有P＞0.05，无统计学意义。结论：体液免疫及细胞免疫异常为ITP发病重要因素，腹腔镜前后T淋巴细胞亚群的改变可反映该病的病例过程，T淋巴细胞亚群联合相关抗体检测对了解ITP的发病情况，判断其疗效及预后有重要意义。 [关键词]特发性免疫性血小板减少性紫癜；T淋巴细胞亚群；血小板相关抗体；流式细胞术 特发性免疫性血小板减少性紫癜（ITP）又名原发性血小板减少紫癜，指无明显诱因下血小板减少症，为临床上常见血液病。其主要表现为血小板寿命缩短、数量减少及骨髓巨核细胞增多。研究表明，ITP与交叉反应所引起的体液免疫和细胞免疫异常有关，尤其T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞的变化与ITP的发病、治疗效果密切相关。而脾脏则是破坏血小板的主要场所，脾切除则可减少免疫系统异常，减少抗体的产生，迅速升高血小板含量，为治疗激素无效性ITP的主要方式。为了进一步探究ITP的发生机制，向临床提供更有效的治疗方式，本研究通过对ITP患者的外周血小板抗体及T淋巴细胞亚群的变化情况进行分析，现总结报道如下： 1资料与方法 1.1临床资料 抽取2013年5月至2014年5月我院腹腔镜脾切除术成功的ITP患者87例作为研究对象，按照手术前后分别予所有患者以治疗前组与治疗后组命名。另抽取36例健康志愿者作为对照组。87例患者中男46例，女41例，年龄9-68岁，平均（30.3±12.4）岁。病程6-25天，平均（3.5±1.1）天。患者皮肤和黏膜出血情况各异，其中牙龈出血10例，肺出血2例，便血5例，鼻出血19例。所有患者诊断结构均符合血小板计数＜100×109，排除继发性血小板减少性疾病。健康志愿者中男21例，女15例，年龄12-66岁，平均（32.7±11.9）岁。 1.2试剂及仪器 流式细胞仪：型号BD FACSCALIBUR BD Bioscience(U.S.A.) 低速离心机：型号TDZ6B,上海卢湘仪器有限公司 螺旋振荡器：型号ZX21，TY10美国Stovall 主要试剂：Goat F(ab’)2IgG-FITC/ Goat F(ab’)2Anti-HumanIgA/ Goat F(ab’)2Anti-HumanIgG/ Goat F(ab’)2Anti-HumanIgM;单克隆三色抗体CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PC5 1.2方法： 1.2.1标本采集 空腹状态，无菌操作下一次性采集受试者外周静脉血4ml,以EDTA抗凝后分开各2ml置于两根试管中，迅速送至流式细胞室。 1.2.2流式细胞术检测外周血血小板相关抗体 ①试剂配置，检查样本是否凝血；②取各受试者抗凝全血1ml,低速离心，洗涤血小板后以CD41-PE进行荧光标记；③分别以Goat F(ab’)2IgG-FITC/ Goat F(ab’)2Anti-HumanIgA/ Goat F(ab’)2Anti-HumanIgG/ Goat F(ab’)2Anti-HumanIgM进行单克隆抗体标记，洗涤后待上机检测；④调试流式细胞仪，检测样本中1000个细胞，读取记录PAIgG、PAIgA、PAIgM平均值。 1.2.3流式细胞术检测T淋巴细胞亚群 ①取各受试者抗凝全血100μl,以CD41-PE进行荧光标记；②分别以单克隆三色抗体CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PC5对血小板进行标记；③洗涤后上机待测；④调试流式细胞仪，以血小板设门，检测细胞1000个，读取记录CD3+、CDD3+CD4+、CD16+56+、CD3+CD8+、CD19+亚群的百分数。 1.3统计学处理 对文中所得数据进行统计学处理，采用SPSS15.0软件进行分析，计量资料采用t检验，计数资料采用χ2检验， P＜0.05为有统计学意义。 2结果： 2.1各组外周血小板相关