UPLC_MSMS和HPLC_MSMS操作规程.docVIP

AB SCIEX TRIPLE QUADTM 5500的PPG质量准确度校准 操作规程 前期准备 PPG稀释溶液的准备，对于5500系列采用的标准溶液： 正离子模式：POS PPG 2E-7M；负离子模式：NEG PPG 3E-5M 离子源的垂直旋钮调至“5”位。标准品质谱条件调谐（Tune and Calibrate） 操作规程 前期准备 检查离子源是否干净，将垂直旋钮跳到位。 用50%甲醇水溶液（乙腈水溶液也可）配置2050ng/mL的标准溶液（根据响应值调节浓度，将目标化合物母离子与周围离子响应值相差明显即可）。 √ 正离子化合物，可添加0.1%甲酸 √ 负离子化合物，无需添加 操作步骤 创建project：打开Analyst软件，在菜单栏中打开Tools”，选择project”下的Create Project”，输入Project name”即可。 双击Hardware Configuration”，激活MS Only”，双击Manual Tuning”，打开调谐界面。 Q1 Scan：在当前界面设置扫描模式为Q1 MS（Q1），将扫描范围设为100MW+30，扫描速率为200Da/s，Duration为5min，先点击Start Syringe Pump”，再点击Start”，找到目标化合物母离子。待扫描完成后，选择Center/Width”，将目标母离子的m/z输入Center（Da）”中，Width（Da）” 设置为，Scan rate”设置为10Da/s，选上“MCA，“Cycles设置为2050，点击Acquire”采集数据并保存。 Product ion Scan：扫描模式为Product Ion（MS2），在Product of”中输入母离子的m/z，将CE值修改为5eV，扫描范围为100MW+30，扫描速率约200Da/s，Duration为5min，点击Start”开始扫描，以5eV为步长手动调节CE，找到合适的子离子（母离子的强度为基峰强度的1/3到1/4为宜），点击Stop”。选上“MCA，Cycles”设置为2050，点击Acquire”采集数据并保存二级质谱图若要获得柱状图需在 优化化合物参数：根据前面选出的母、子离子，组建MRM离子对，输入右侧框中，每对离子对建议分析时间为100ms（若化合物比较多减小时间），并输入ID。点击Edit Ramp...”，先后选择CE和DP，点击“Start”将优化好的CE和DP值添加到表格中。 保存质谱方法，灭活MS Only”。 前期准备 2、 二、操作步骤 ℃；“GS1”：50；“GS2”：50；每一个的MRM的驻留时间（Dwell Time）要进行优化，尽可能使“Total Scan Time”控制在最窄峰的峰宽的1/12； “Duration”与UPLC的样品运行时间设为一致，保存此质谱方法。 双击左侧栏“ACQUITY Method Editor”，通过“File”打开刚保存的质谱方法。选择进样方式、进样针的强洗和弱洗、色谱柱温度及样品室温度、流动相组成与梯度程序及运行时间（与质谱分析时间一致），保存此方法。 双击左侧栏“Build Acquisition Batch”建立处理批次，选择上述保存的方法，添加批次（SET1可修改为日期），添加样品，设置样品名称、甁号（48vial 2mL holder）及“Date file”，保存此批次。 提交（submit）此样品序列，点击工具栏中“Equilibrate”按钮，观察压力变化，待 “Delta” 小于50时，点击工具栏中“Ready”，准备进样，在“View Queue”界面下可查看所提交的序列，准确无误后，点击“start sample”开始进样。 三、结束工作 1、重新建立一个分析批次，选择Penicillin项目下的“UPLC_MS_FLUSH”方法，放置空白样品（水）于样品盘中，提交并运行，对液相及质谱仪进行冲洗。 2、待机器冲洗完毕后，灭活“UPLC MS”系统，关闭质谱软件，关闭UPLC电源。 Waters Alliance HPLC e2695串联质谱（HPLC-MS/MS） 操作规程 一、前期准备 1、检查线路是否连接完好。 2、离子源垂直旋钮调至“2”位。 二、操作步骤 “Menu/Status”，选择“Direct Function”进入冲洗选项界面，分别进行“Dry Prime”、“Wet Prime”及“Purge Injector”，排除管道内的气泡。 2、安装并活化新的色谱柱，一般活化30min即可。 3、打开桌面“Empower”软件，输入用户名（system）及密码（manager）。点击“配置系统”，在配置管理器界面打开“系统”，将“allia