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牛肉膏蛋白胨培养基的配制与灭菌 方月琴 一、复习 二、实验：配培养基与灭菌 三、斜面的划线培养 四、倒平板的操作 五、平板划线培养 一、复习 《微生物培养与检验》主要课程内容 1.微生物营养需求 2.微生物形态 3.微生物纯化、分离 4.微生物培养、筛选与保存 5.微生物检验 课程内容 规则： 1.上课不迟到：第1、5节课，提前10min到教室 2.下课前，自己的实验物品归类，该清洗的清洗，该收拾的收拾 3.值日生负责擦黑板、扫地、擦桌；为大家做好服务工作 4.上课时间请不要玩手机 安全操作与标准操作 （一）微生物培养基的制备 （二）微生物的消毒灭菌 （三）认识微生物培养所需的仪器设备 （一）微生物培养基的制备 培养基：是人工配制的、适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的营养物质。 满足微生物生长发育的水分、C，N，生长因子，P，S，Na，Ca等 适宜的酸碱度、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位，合适的渗透压 根据物理状态划分 培养基分 液体、半固体和固体 3种 液体培养基有各种肉汤培养基，主要用于细菌扩大培养； 半固体培养基含0.4%琼脂，主要用于保存细菌 固体培养基含15%~20%琼脂，主要用于分离细菌 培养基的配制原则 1.选择适宜的营养物质 实验室中常用： 2.营养物质的浓度及配比合适 3.控制pH条件 细菌和放线菌：pH7.0~7.5 酵母菌和霉菌：pH4.5~6.0 4.控制氧化还原电位 5.原料来源的选择 尽量利用廉价且易获得的原料作为培养基成分 6.灭菌处理 避免杂菌污染，要对所用器械及工作场所进行消毒与灭菌 培养基一般采取高压蒸汽灭菌，一般培养基0.1MPa，121.3℃ 15~30min （二）微生物的消毒灭菌 灭菌指利用物理和化学的方法杀灭或除去物料及设备中一切生命物质的过程。 消毒是指用物理或化学的方法杀死物料、容器、器具内外的病原微生物，一般只能杀死营养细胞而不能杀死芽孢。 消毒不一定能达到灭菌的要求，而灭菌则可达到消毒的目的 无菌 消毒灭菌方法： （一）干热灭菌法 （二）湿热灭菌法 （三）过滤除菌 （四）紫外线杀菌 （五）药物杀菌 （一）干热灭菌法 1.火焰灭菌法 2.热空气灭菌法 140~160℃2~3h （二）湿热灭菌法 1.高压蒸汽灭菌法 121℃ 20~30min 2.常压蒸汽灭菌法 3.常压间歇灭菌法 （三）过滤除菌 薄膜滤菌器0.22μm和0.45μm （四）紫外线杀菌 240~280nm波段紫外线杀菌力较强 多以253.7nm作为紫外线杀菌波长 特点：穿透力弱 超净工作台： （五）药物杀菌 1.酒精 2.新洁尔灭 （三）认识微生物培养所需的仪器设备 1.培养平板 2.试管与棉塞 3.接种环，涂布棒 4.高温高压蒸汽灭菌锅 p42 高压蒸汽灭菌 请回顾灭菌锅的操作方法 1）用之前检查水位及水质。若水质不好，需换水 2）放置灭菌物品，勿过满；瓶子灭菌，瓶盖拧松 3）盖上锅盖，相对的两个螺帽一起拧 4）启动加热，同时打开放气阀；检查安全阀是否关上。调整温度时间121℃ 15min。 5）待排气阀冒出大量热气并持续约2~5min后排尽冷空气后，再将其关闭； 6）灭菌结束，待压力下降至0，可打开放气阀，之后开盖。注意防止烫伤 7）固体物品可进行干燥；液体物品冷却后拧紧。尽量避免二次污染。 5.鼓风干燥箱 6.超净工作台 每次使用前，先用75%酒精（或新洁尔灭）擦洗台面，并提前用紫外线灭菌灯照射15~30min处理净化工作区内积存的微生物；关闭灭菌灯后应启动风机使之运转2min后再进行培养操作；工作区内不应存放不必要的物品，以保持洁净气流流型不受干扰；使用完毕应及时清理工作台面上的物品并用酒精擦拭台面使之始终保持洁净。 7.微量移液器的使用 今天的工作： 1.固体物品的灭菌 2.配制培养基并进行灭菌 3.学习倒平板 4.学习斜面培养基制作 5.超净台的准备 6.划线接种 7.灭菌效果检查 开始实验 1.固体物品： 1）平皿（6只/组） 2）试管与棉塞/塑料封口（6只/组）的包扎 3）灭菌蓝色、黄色和白色枪头 将以上物品放入灭菌锅中进行灭菌121℃ 20min 2.培养基： 培养基分 液体、半固体和固体 3种 液体培养基有各种肉汤培养基，主要用于细菌扩大培养； 半固体培养基含0.4%琼脂，主要用于保存细菌 固体培养基含15%~20%琼脂，主要用于分离细菌 （1）固体培养基配置 牛肉膏蛋白胨培养基 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g NaCl 5g 琼脂 15-20g pH 7.4-7.6，加水至