piRNA的生物合成及其在生殖细胞中的功能及答案.docVIP

piRNA的生物合成及其在生殖细胞中的功能 Carla Klattenhoff and William Theurkauf* 小干扰RNA和微小RNA是由双链的RNA前体经核酸内切酶Dicer切割生成的，并与Argonaute家族蛋白共同作用破坏转录物或沉默翻译。一类清楚的RNA核苷酸长度为24-30个，通过Dicer依赖型机制生产，与Argonaute蛋白家族中的Piwi蛋白结合。关于苍蝇、鱼和小鼠的研究暗示了Piwi蛋白结合RNAs（piRNA）在生殖细胞发育、沉默自私DNA元件和维持种系DNA完整性中的功能。然而，无论是piRNA染色质主要控制机制、基因转录、RNA稳定性或RNA翻译，还是piRNA的生物合成都不是很清楚。在这里，我们回顾了近期的关于piRNA生成和功能的研究，并讨论关于这个耐人寻味的新型小RNA的悬而未决的问题。 前言 1993年，安布罗斯和他的同事发现，线虫的lin-4基因通过负调控编码一个小调控RNA并与lin-14的转录单元互补（Lee等人，1993）。这些开创性的研究确定了第一个微小RNA（miRNA）。在动物和植物实验室中，非编码的小RNA随后成为强大的实验工具和关键的发育调节者（Baulcombe，2004；汉农，2002；Kloosterman和Plasterk，2006；梅洛和康特，2004）。目前，21个核苷酸（nt）的小干扰RNAs（siRNAs）被频繁用于实验性的操纵基因表达，它是通过Dicer核酸内切酶处理长双链RNA（dsRNA）的前体得到的，随后形成中间体RNA-蛋白质复合体。该中间体取代RNA的其中一条链（被称为“过客链”），并产生成熟的RNA诱导的沉默复合体（RISC），其中包含一条能够与Argonaute蛋白家族结合的单链（“引导链”）。当siRNA的引导链与靶RNA完全互补时，Argonaute蛋白识别特异性序列并切割（Hannon，2002；Meister和Tuschl，2004）。在体内，siRNA途径会降低病毒生命周期中RNA中间体的产生，因此在限制病毒感染中起重要作用（Wang等，2006）。通过比较，miRNA是从由染色体基因编码的茎环转录物中衍生出来的。初级茎环RNA（priRNA）是在细胞核中由Drosha核糖核酸酶催化产生premiRNAs，然后从细胞核中出来并在细胞质中被Dicer酶内切酶催化裂解，从而生成22 nt的成熟miRNA。这些miRNA与Argonaute蛋白结合并诱导靶基因活性的同源依赖性下调。miRNA与其目标转录物间的不完全碱基配对将会诱导翻译沉默，而完美的碱基配对将触发RNA破坏。在miRNA途径突变的突变体中，发育破坏并且经常导致胚胎致死（Du和Zamore，2005；Kloosterman和Plasterk，2006）。 最近的研究发现了一类新的24-30 nt的RNA，其由无Dicer依赖性机制催化，并产生能够与Argonaute蛋白家族中的Piwi蛋白结合（Aravin等，2006；Brennecke等，2007；Girard等，2006；Grivna等，2006；Gunawardane等，2007；Houwing等，2007；Lau等，2006；Saito等，2006；Vagin等，2006；Watanabe等，2006）。其对于雌雄果蝇生育能力是必不可少的（Lin和Spradling，1997）。在一些系统中，这些与Piwi蛋白相互作用的RNA（piRNA）主要是从转座子和其他重复序列元件中衍生而来的（Brennecke等，2007；Gunawardane等，2007年；Saito等，2006），从而导致它们曾定义为重复序列偶联的小干扰RNA（rasiRNAs）（Aravin等，2003）。现在已很清楚，piRNA即可以从重复序列也可以从复杂的DNA序列元素中衍生出来（Aravin等，2007；Brennecke等，2007；Houwing等，2007），并且piRNA包含rasiRNAs。因此，我们在下面的讨论中使用更通用的术语——piRNA。小鼠、果蝇和斑马鱼的遗传学研究表明，piRNA在种系发展中是至关重要的（Carmell等，2007；Chen等，2007；Cook等，2004；Cox等，1998；考克斯人，2000；Deng和Lin，2002；Gillespie和Berg，1995；Houwing等，2007；Kuramochi-Miyagawa，等，2004；Pane等，2007；Schupbach和Wieschaus，1991）。然而，参与piRNA合成的蛋白质揭示，其能够在体细胞中调控基因表达（Grimaud等，2006；Pal-Bhadra等，2002；Pal-Bhadra等，2004），以