脂类细胞化学苏丹III染色法山东大学研究报告.docVIP

脂类细胞化学——苏丹III染色法 【实验目的】 【实验】 脂肪是体内储存能量和供给能量的重要物质，根据其性质可以分为中性脂肪、脂肪酸、胆固醇、鞘磷脂等。很多细胞都含有脂肪，游离状态的脂肪呈小滴状悬浮于细胞质内，比较显著的如肝细胞。脂肪小滴可以集合，将细胞质及细胞核挤到一旁，如脂肪细胞。如果组织中脂肪过多，将会影响其正常功能。如脂肪肝。 脂肪不溶于水，易溶于浓乙醇、苯、氯仿和乙醚等，因此制作脂类标本一般不用石蜡切片，而用冰冻切片或者铺片法以保存脂类，固定多用甲醛类固定液。其染色方法有脂溶性染料显示法、化学显示法和特异染色法等。 脂溶性染料显示法利用苏丹染料中的苏丹III、苏丹IV或者苏丹黑等溶于脂类，而使脂类显色的原理显示脂类，使用时，要注意选择溶剂，要求既要溶解苏丹染料，又不溶掉脂肪。 苏丹染料是偶氮染料，它对脂类的显示是一种简单的物理变化。苏丹染料是一种脂溶性染料，易溶于乙醇但更易溶于脂肪，所以当含有脂肪的标本与苏丹染料接触时，苏丹染料即脱离乙醇而溶于该含脂肪结构中而使其显色。 脂肪染料一般选用有机溶剂做溶剂，丙酮和乙醇对染料和脂肪都是很好的溶剂，这样可以染色大的脂肪积累块，但是小的脂肪滴会溶解。60%异丙醇当溶剂，可以减轻脂类的溶解。丙二醇或磷酸三乙酯不会溶解脂类物质，但是能溶解染料，是比较理想的溶剂。用这些溶剂配的染料溶液要过滤以去掉沉淀，防止蒸发，因蒸发会引起染料在材料中积累。常用相同溶剂洗掉多余的染料，然后再用水洗，可以防止多余的染料在材料中沉淀【实验】 小鼠 试剂 苏丹Ⅲ染液：将0.15克苏丹溶解于100ml70%酒精或纯丙酮和70%酒精混合液中，临用时过滤，所得滤液即为饱和浓度。 解剖针、载玻片、盖玻片、显微镜、镊子、剪刀。 【】 【】1N NaOH lN等于1L溶液中某种物质1mol除以该物质的氢当量价所得数值的量 氧化钠(NaOH )；分子量＝40．005，当量价＝1 1N Na0H的配制方法为：m＝40．005／1＝40．005g。取40．005gNaOH溶解于1L蒸馏水中 4%多聚甲醛 8%多聚甲醛 50ml 0.1M磷酸盐缓冲液 50ml PH7.2 先取50 ml 8%多聚甲醛，用0.1M磷酸二氢钠和0.1M磷酸氢二钠将PH值调至7.2 4．Bouin液： 苦味酸饱和水溶液 75ml 36％~40％福尔马林液 25ml 冰醋酸 5m1 5．改良Bouin氏固定液苦味酸饱和水溶液 45ml 95%酒精 45ml 36％~40％福尔马林液 5ml 冰醋酸 5m1 6．Carnoy液： 冰醋酸 10 m1 氯仿 30 m1 无水乙醇 60 m1 以上三者临用前混合，预冷至4℃后使用。24小时后固定液失效。 （三）染色液 1．Harris苏木精液 A液： 苏木精 1g 无水酒精 10ml B液： 铵矾或钾矾 20g 蒸馏水 200ml 氧化汞 0.5ml 冰醋酸 8ml 将矾溶于水，加热溶解（B液），稍冷后将苏木精酒精液（A液）混入B液，加热，稍冷却，加氧化汞，再继续加热1分钟，染液变为紫色，注意在加氧化汞时宜逐渐少量加入，防止染液溅出。全冷后呈深紫色，将烧杯口用纱布盖好，隔夜过滤，在过滤液内每96 ml中加4 ml冰醋酸，放置1周后成熟，即可用于染色，保存期1~2个月。此染液在加醋酸后，对核染色特具选择性，故很适于脱落细胞的核染色。由于染液内已加有氧化剂，故不能长期储存，但利于配后即用。 2．Mayer苏木精掖 苏木精 1g 钾矾或铵矾 50g 碘酸钠 0.2g 蒸馏水 1000ml 水合氯醛 50g 枸橼酸 1g 将苏木精，钾矾及碘酸钠依次加入水内，略加热并搅拌，此时液体呈蓝色，待全溶后过夜。再加入水合氯醛及枸橼酸并加热至煮沸5分钟，冷后过滤备用。如不急用可不煮沸而在室温待其成熟，染液可较长期贮存使用。核染色鲜明，染色时间5—10分钟。用该染液染色后，不需分化，充分水洗蓝化后即可，伊红复染细胞质，使用一段时间后就要换新溶液。 3．Hasnsen甲矾苏木精的配制 A液：苏木精 1g 无水乙醇 10ml B液：钾矾 20g 蒸馏水 200ml C液：高锰酸钾 1g 蒸馏水 16ml 三液分别溶化后，将A液倒入B液，再加入C液3ml，充分搅拌均匀后加热至沸腾，1分钟左