5_第五章_中药的指纹图谱-20130310概览.ppt

* （一）图谱信息获取 分析图谱：提取稳定且具有指纹意义的特征峰，进行谱峰描述，给以编号。 要求：主要特征峰与相邻峰R≥1.2，其他特征峰也应达到一定分离。 峰顶到峰谷的距离至少应大于该峰高的2/3，如果达不到则两个峰可以合并为一个峰计算。 * 为了有助于辨认和匹配，峰保留时间的波动应控制在该峰保留时间的±5％～±10％。 选择参照物或在同一色谱中选一个适当的色谱峰作为内参照物，计算特征峰的相对保留时间和相对峰面积比，考察指纹图谱的稳定性和重复性。 以特征峰的相对保留时间和相对峰面积比作为参数，峰面积大于10%的峰规定其相对峰面积值的范围，建立对照用指纹图谱（共有模式），且用以判断样品的真实性。 * （二）图谱信息处理 图谱解析就是从图谱中分析和提取有用的特征信息（即能反映不同样本在化学成分及含量上差异的特征信息），并将其转化为计算机能接受的数量化矩阵，以获取能够反映中药质量的客观指标，为建立中药质量评价系统提供规范化标准。 1．模糊信息分析法 2．人工神经网络法 3．灰色关联聚类法 4．主成分分析 * （三）指纹图谱相似度评价 相似度是中药材供试品指纹图谱与对照指纹图谱共有模式的相似性的量度。 相似度比较属模糊信息分析法的一种，可以量化描述指纹图谱相似性，即客观的数字化描述。 * 相似度计算方法与原理 夹角余弦测度 相关系数测度 指数相似系数测度 相似性比测度 特征变量上变化模式的相似性 欧氏距离测度：反映特征变量值上大小差异的供试品间亲疏程度的相似 * 相似度评价软件 中药指纹图谱计算机辅助相似度评价软件 中药指纹图谱鉴别分析系统（The Fingerprint Analysis System of Chinese Medicine） 计算机辅助相似性评价系统（Computer Aided Similarity Evaluation） 夹角余弦法 符合要求：相似度：0.9~1.0 * “中药指纹图谱计算机辅助相似度评价软件”操作步骤 建立共有模式模板 生成相似度计算软件供试样本（.txt文件、.csv文件）， 分别按相似度计算软件进行处理。 * 建立共有模式模板： 导入建立共有模式的多批据有统计意义的样本（.txt、.csv文件）； 数据预处理和色谱图的缩放比较； 峰位（保留时间）校正和谱峰自动匹配； 指纹图谱相似度计算； 经反复删除、添加样本，得共有模式图形及数据。 第五节 研究实例 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以含0.2%甲酸和0.2%三乙胺的水溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为254nm；柱温为25℃。理论板数按士的宁峰计算应不低于6000。 * 一、腰痛宁胶囊指纹图谱 时间（分钟） 流动相A（%） 流动相B（%） 0～20 8→18 92→82 20～50 18→98 82→2 50～60 98 2 参照物溶液的制备 取士的宁对照品适量，加三氯甲烷制成每1mL含0.5mg的溶液。精密量取上述对照品溶液2mL，置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得（每1mL含士的宁0.1mg）。 * 供试品溶液的制备 取装量差异项下的本品内容物，混匀，取2.0g，精密称定，置50mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，再加入浓盐酸0.63mL，密塞，摇匀，称定重量，超声处理（功率450W，频率40kHz）45分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 * 测定法 分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10ml，注入液相色谱仪，记录60分钟的色谱图，测定，即得。 按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算，供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度不得低于0.90。 * 二、满山红油特征图谱 色谱条件与系统适用性试验 以5%二苯基-95%二甲基聚硅氧烷为固定相的毛细管柱（柱长为30m，内径为0.25mm，膜厚度为0.25mm）；柱温为程序升温：初始温度100℃，保持18分钟，以每分钟0.5℃的速度升温至110℃，保持10分钟；再以每分钟1℃的速度升温至140℃，保持20分钟；分流进样，分流比10:1。载气为氮气，载气流速为每分钟1.3mL。理论板数按牻牛儿酮峰计算应不低于400000，峰4与峰5的分离度应不低于1.5。 * 参照物溶液的制备 取乙酸龙脑酯对照品、牻牛儿酮对照品适量，精密称定，分别加甲醇制成每1mL含乙酸龙脑酯20mg和牻牛儿酮0.5mg的溶液，即得。 供试品溶液的制备 取本品0.1g，精密称定，置50mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。 * 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1ml，注入气相色谱仪，测定，记录色谱图，即得。 供试品特征图谱中应