植物生理学实验4叶绿体色素的提取、分离及理化性质（纸层析法).ppt

韩山师范学院生物系 植物生理学实验 实验四 叶绿体色素的提取、分离及理化性质（纸层析法 实验原理 2.类胡萝卜素 （一）叶绿体色素： 胡萝卜素 叶黄素 叶绿素a 叶绿素b 1. 叶绿素 叶绿素a 叶绿素b 胡萝卜素 叶黄素 实验原理 均为亲脂性 亲水性： 均不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇、丙酮等有机溶剂提取。 极性大小： 叶绿素b 叶绿素a 叶黄素 胡萝卜素 根据相似相溶原理，在有机溶液中的溶解度： 叶绿素b 叶绿素a 叶黄素 胡萝卜素 分离色素的方法有多种，如纸层析、柱层析等。纸层析是其中最简单的一种。当溶剂不断地从层析滤纸上流过时，由于混合色素中各种成分在两相 即流动相和固定相 间具有不同的分配系数，它们的移动速度不同，使样品中的各种成分得到分离。 实验原理 叶绿素在光照下可产生暗红色的荧光；叶绿素的化学性质很不稳定，易受强光的破坏，特别是叶绿素与蛋白质分离后，破坏更快。 叶绿素分子头部的金属卟啉环中心均为Mg2+。在弱酸作用下，叶绿素分子中的镁可被H+ 取代而形成褐色的去镁叶绿素，后者遇铜则可形成绿色的铜代叶绿素。 铜代叶绿素很稳定，在光下不易被破坏，故常用此法制做植物的原色标本。 实验目的 掌握叶绿体色素的提取方法。 掌握纸层析法分离叶绿体色素的原理和步骤。 掌握叶绿体色素的部分理化性质。 植物材料: 　菠菜叶片 实验器材：试管25 ml量筒、软木塞、台式天平、研钵、10 ml量筒、试管、 酒精灯、毛细滴管、滤纸、剪刀（自备）。 实验试剂：丙酮、碳酸钙、石英砂、四氯化碳、无水硫酸钠、浓盐酸、醋酸铜晶体。 实验器材和试剂 称取新鲜菠菜叶片2g，剪碎放入研钵中，加入丙酮5 ml、少许CaCO3 中和细胞中的酸防止Mg2+从叶绿素中心释放 和石英砂，研磨成匀浆，再加入适量的丙酮（5 ml），然后用漏斗过滤，即得叶绿体色素液。 注意：叶绿体色素液各组做一份，共用。 叶绿素的提取 2 3 4 5 1 准备滤纸条：长×宽 14×1 cm。一端剪成窄条：长1.5 cm,宽0.5 cm 用毛细管（可用移液枪枪头）吸取叶绿体色素提取液点于滤纸的下端窄条上方约1cm处的中央，如色素过淡，用电吹风吹干后再重复4-5次（事先用铅笔在靠窄条的滤纸端约1 cm处画一横线，色素液滴于横线处，并用吹风机吹干）。 在量筒中加入四氯化碳3-5毫升及少量硫酸钠，将滤纸悬于塞子上。扦入试管，使窄端浸入溶剂中，立于暗处层析0.5-1小时后观察分层现象。 注意：要求每个同学做一份。 叶绿体色素的分离——纸层析法 胡萝卜素 叶黄素 叶绿素a 叶绿素b 最上端橙黄色的是胡萝卜素，其次为叶黄素，于下面蓝绿色为叶绿素a，最后的黄绿色为叶绿素b. 叶绿素提取液荧光现象观察 取色素提取液少许于试管1中： 分别在反射光和透射光一侧，观察提取液的颜色； 透射光方向观察到绿色； 反射光侧观察到的血红色，即为叶绿素产生的荧光颜色。 铜代叶绿素反应 取上述色素提取液少许于试管2,3中，分别滴加浓盐酸少许，形成了去镁叶绿素。然后试管3加醋酸铜晶体少许，慢慢加热溶液则又产生鲜亮的绿色。此即形成了铜代叶绿素。 注意：叶绿素理化性质测定每组各做一份观察。 仔细观察和记录实验结果。 画图说明叶绿体色素纸层析结果，并解释原因。 解释叶绿素的荧光现象。 解释叶绿体色素分子的替代作用现象。 结果分析 研磨提取叶绿素时，为何要加入 CaCO3？ 铜在叶绿素分子中具有替代镁的作用，这有何实用意义？ 思考题 * * 渗透作用是指水分子 或其他溶剂分子 通过半透膜从低浓度溶液向高浓度溶液的扩散。 发生渗透作用的条件：有半透膜 膜两侧有浓度差 . * 渗透作用是指水分子 或其他溶剂分子 通过半透膜从低浓度溶液向高浓度溶液的扩散。 发生渗透作用的条件：有半透膜 膜两侧有浓度差 . * 渗透作用是指水分子 或其他溶剂分子 通过半透膜从低浓度溶液向高浓度溶液的扩散。 发生渗透作用的条件：有半透膜 膜两侧有浓度差 . * 渗透作用是指水分子 或其他溶剂分子 通过半透膜从低浓度溶液向高浓度溶液的扩散。 发生渗透作用的条件：有半透膜 膜两侧有浓度差 . * * 渗透作用是指水分子 或其他溶剂分子 通过半透膜从低浓度溶液向高浓度溶液的扩散。 发生渗透作用的条件：有半透膜 膜两侧有浓度差 . * * * * * * 渗透作用是指水分子 或其他溶剂分子 通过半透膜从低浓度溶液向高浓度溶液的扩散。 发生渗透作用的条件：有半透膜 膜两侧有浓度差 . * * 渗透作用是指水分子 或其他溶剂分子 通过半透膜从低浓度溶液向高浓度溶液的扩散。 发生渗透作用的条件：有半透膜 膜两侧有浓度差 . * * 渗透作用是指水分子 或其他溶剂分子 通过半透膜从低浓度溶液向高浓度溶液的扩散。 发生渗透作用