紫外可见分光光度法pjm技巧.ppt

小结 饱和有机化合物无UV-Vis； 电子跃迁类型与分子结构及存在基团有密切关系 习题： 选用的显色剂应只与被测组分发生显色反应，在测定波长处无明显吸收；显色反应产物的组成及性质要稳定，ε要相对较大。 显色反应条件的选择： 显色剂用量、溶液酸度的控制、测量波长的选择、空白溶液的选择 习题： 1. 双波长分光光度计的输出信号是（ ） 2.在比色法中，显色反应的显色剂选择原则错误的是（ ） 3.用分光光度法测定KCl中的微量I-时，可在酸性条件下，加入过量的KMnO4将I-氧化为I2，然后加入淀粉，生成I2-淀粉蓝色物质。测定时参比溶液应选择（ ） 4.今有A和B两种药物的复方制剂溶液，其吸收曲线相互不重叠，下列有关叙述正确的是（ ） 5. 精密称取试样0.0500 g，用0.02 mol/L HCl 稀释，配制成250 mL。准确吸取2.00 mL，稀释至100 mL，以0.02 mol/L HCl为空白，在253 nm处用1 cm吸收池测得T＝41.7％，其ε＝12000 L/mol?cm ，被测组分的分子质量＝100.0，试计算 （263 nm）和试样中被测组分的百分质量分数。 （二）有机化合物结构研究 二、分光光度计的类型 一 按仪器使用波长分类： ①真空紫外分光光度计（0.1-200 nm）； ②可见分光光度计（350-700 nm）； ③紫外-可见分光光度计（190-1100 nm）； ④紫外-可见-红外分光光度计（190-2500 nm）。 （二）按仪器使用的光学系统分类： ①单光束分光光度计； ②双光束分光光度计； ③双波长分光光度计。 （１）单光束分光光度计 经单色器分光后的一束平行光，轮流通过参比溶液和样品溶液，以进行吸光度的测定。 优点：自动记录，快速全波段扫描。可消除光源不稳定、检测器灵敏度变化等因素的影响，特别适合于结构分析。 缺点：仪器复杂，价格较高。 对于多组分混合物、混浊试样（如生物组织液）分析，以及存在背景干扰或共存组分吸收干扰的情况下，利用双波长分光光度法，往往能提高方法的灵敏度和选择性。利用双波长分光光度计，能获得导数光谱。 （三）紫外-可见分光光度计主要技术指标 1.波长范围：表示仪器能测定的波长范围。 波长范围越大，仪器越好，这与仪器使用的灯有关。 2.波长精度：表示仪器单色器波长误差程度。 波长误差越小，仪器精度越高，这与仪器使用的单色器有关。 3.杂散光：表示单色光的纯度。 这与制作单色器的材料和加工工艺有关。 4.光度的测量精度：表示仪器每次测定显示读数的精确度，即仪器能准确读小数点后几位。 位数越多，仪器精度越高，这与仪器使用的检测系统有关。 5.光度测量的重现性：每次A读数的重现性。 这与仪器使用的检测器的质量有关。 6.分辨率：表示仪器分辨吸收光谱微细结构的能力，即指仪器对于紧密相邻的峰可分辨的最小波长间距。 这是衡量仪器性能的一个综合指标。 本章要求 掌握UV-Vis吸收光谱产生的原因 掌握电子跃迁的类型及常见术语 掌握吸收带的类型、特点及影响因素 掌握Lambert—Beer定律及使用条件 掌握UV-Vis分光光度法对化合物进行定性和定量分析的方法 熟悉UV-Vis分光光度计的主要部件、工作原理；UV-Vis吸收光谱与化合物结构之间的关系 习题： 1.双波长分光光度计与单波长分光光度计的主要区别在于（ ） 2.常用作光度计中获得单色光的组件是（ ） 3.在比色法中，显色反应应选择的条件有 4.红外光谱与紫外吸收光谱的区别是（ ） 5. A与B两种物质的对照品溶液及样品溶液，用等厚度的吸收池测得吸光度如下表。（1）求被测混合物中A和B含量。（2）求被测混合物在300nm处的吸光度。 4. 检测器 利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号，常用的有光电管、光电倍增管、光电二极管、光电摄像管等。 要求灵敏度高、响应时间短、噪声水平低、稳定性好的优点。 5. 显示器 将监测器输出的信号放大并显示出来的装置。 常用的有液晶数字指示窗口和计算控制显示。 样品池 参比池 优点：简单，价廉，适于在给定波长处测量吸光度或透光度。 缺点：一般不能作全波段光谱扫描，要求光源和检测器具有很高的稳定性。 比值 光源 单色器 吸收池 检测器 显示 光束分裂器 （2）单波长双光束分光光度计 （３）双波长分光光度计 由同一光源发出的光被分成两束，分别经过两个单色器，得到两束不同波长（?1和?2）的单色光；通过切光器以一定的频率交替通过同一样品池，然后由检测器交替接收信号，最后由显示器显示出两个波长处的吸光度差值ΔA。 无需参比池。△A就是扣除了背景吸收的吸光度。 光源 检测器 单色器 单色器 切光器 吸收池 双