培训课件--结核病实验室检测新诊断技术.pptVIP

操作较复杂。 特异度与灵敏度不高。 基因芯片耐多药检测试剂已获得欧盟体外诊断试剂证书（CE-IVD）。 中国药品食品监督管理局的医疗器械证书。 可以作为临床耐药结核病临床诊断和治疗的依据。 五、结核和利福平耐药的快速分子鉴定（x-pert） 适用范围： 1、TB复合群鉴定。 2、利福平耐药检测 。 原理：多重PCR扩增和反向杂交来识别。 可以在2小时出报告结果。 实验室方法 痰标本的前处理：同前方法。 试剂加入去污处理的痰标本中。 室温下手工晃动密闭痰盒，15分钟内2次，然后取2ml灭活后的物质加入检测盒(其内含相当于0.7ml未处理痰液或0.5ml已去污处理的痰液)，检测盒放入检测平台。 MTB/RIF检测系统直接输出电子结果。 实验室方法 阳性培养物经MPT64抗原检测以确定其是否属于结核分枝杆菌菌属。 L-J培养基比例法药敏 /MIGT 快速药敏法。 常规的DNA核酸扩增 hain方法检测耐药 实验室方法 试剂分别按2:1和3:1加入未经处理的痰标本和去污处理的痰标本中。 室温下手工晃动密闭痰盒，15分钟内2次，然后取2ml灭活后的物质加入检测盒(其内含相当于0.7ml未处理痰液或0.5ml已去污处理的痰液)，检测盒放入检测平台。 MTB/RIF检测系统直接输出电子结果。 　 灵敏度 特异度 培阳 97.60% - 涂阳培阳 99.80% - 涂阴培阳 90.20% - 检测一份标本 72.50% 99.20% 检测两份标本 85.10% 98.60% 检测三份标本 90.20% 98.10% 检测HIV合并感染 93.90% - 检测HIVTB 98.40% - 与HAIN比较 无差异 无差异 与PCR比较 高 无差异 　 灵敏度 特异度 211例利福平耐药 99.10% 506例利福平敏感 　 100% 讨论 该检测方法适用于低收入国家精确诊断肺结核并能够进行福平耐药筛选的快速检测方法。 以培养方法作金标准，该方法可以检测出97%以上的肺结核患者，包括90%的涂阴病人。 南非有60%-80%的人感染HIV，鉴于合并HIV+TB阳性出率较低，尤其HIV+TB-，MTB/RIF有较高的检出率。 讨论 MTB/RIF优点：简单、安全 标本处理简单，操作方便，检测全自动，2小时内出结果，机器判读，结果精确，减少核酸污染。 该检测方法产生的气溶胶无传染性。 对实验室生物安全级别要求较低，可以在基层开展（从生物安全要求出发），由于较快速，可以减少诊断延迟，检测更多标本。 讨论 MTB/RIF缺点： 基层实验室人员培训、温度控制、电力保障、是否到位。 但是每年一次的仪器校准对于基层实验室是个挑战，不过已经大量开展能否在基层实验室应用的验证了。 技术尖端，生产费用较高。尽管基金会试图通过谈判降低价格和低检测费用，但仍会比显微镜价格要高，但比培养和药敏检测仪器要便宜。 结核病实验室检测新诊断技术介绍省结核病参比实验室 杨丹丹 发光二极管荧光显微镜（LED）方法 液基夹层杯技术 线性探针耐多药检测技术（HAIN） 基因芯片耐多药检测技术（GENECHIP） TB和利福平耐药快速分子鉴定（X-Pert） 一、发光二极管荧光显微镜（LED）方法 适用范围：痰涂片镜检 所需试剂/仪器： LED显微镜、荧光染色液 中盖项目：淮安市（淮阴区、楚州区） 原理： 发光二极管荧光显微镜（LED） 镜下视野 发光二极管荧光显微镜（LED） 不需要加热玻片，步骤简单 视野比普通的显微镜大大2-4倍 对数目少的不必使用镜油 节省人力时间，时间为普通的1/4每天可检查至少60个涂片 可帮助早期诊断肺结核 – 即使菌浓度较低 杆菌也有很高的灵敏度，与ZN相比阳性发现率平均增加10% 不需要空调设施 不需要暗室 诊断性能优于标准荧光显微镜 寿命长（~ 15-20,000小时） 荧光染色液有致癌作用，推荐自动染色机。 涂片需避光低温保存。 需加强操作人员的培训和质量控制。 成本低廉，价格低于现有的光学显微镜。 适合县、乡级基层实验室使用。 二、液基夹层杯技术 适用范围：痰涂片镜检 十一五国家重大科技专项：泰兴、江阴 厂家：湖南天骑公司 原理：集菌法 流程图 痰标本消化灭活 基片的夹层杯 离心 细菌附着在基片 在夹层杯中直接染色 取出基片 于载玻片上 镜检 自动阅片计算机报告系统。 所需仪器设备：普通的抗酸染色液、彭氏杯（专利）、涂片机、KP21型快速干片机、抗酸杆菌自动阅片计算机报告系统。 　 阳性检出率 标本及性状 液基法 直涂法 754份痰标本 23.50% 16.80% 脓性